科研产出
野生鸟类新城疫病毒分离株的生物学特性和系统发育分析
《中国兽医学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了掌握野鸟新城疫病毒（NDV）的流行情况，2016年对山东东营黄河口湿地野鸟NDV进行了流行病学调查，共采集了352份健康野鸟的泄殖腔拭子，在鸡胚上进行病毒的分离鉴定，然后对分离株进行了生物学特性和遗传进化分析。结果显示，共分离到9株NDV,其中8个毒株MDT和ICPI分别为>96 h和≤0.5,为低毒力株；1个毒株MDT和ICPI分别为79 h和1.62,为中等毒力株。对F基因测序及序列分析显示9个分离株F蛋白裂解位点处氨基酸序列为112E-R-QE-R-L117或112G-R-Q-G-R-L117,具有典型的弱毒株特征。F基因系统发育分析将9个分离株分为ClassⅠ和ClassⅡ两类，其中6个分离株属于ClassⅠ,3株属于ClassⅡ,进一步分析显示6株ClassⅠ毒株中2株属于基因1.2型，4株属于基因1.1.1型，3株ClassⅡ毒株中1株属于基因Ⅰ型，2株属于基因Ⅱ型。结果表明，野鸟携带NDV非常普遍且基因型较广泛，Ⅰ类NDV仍是野鸟中的优势基因型。分离到2株与疫苗株LaSota同源的毒株，其中虽然1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸基序与疫苗株LaSota一致，但生物学特性显示为中等毒力株，该毒株可能是在疫苗的选择压力下进化而来，对环境及家禽存在潜在的威胁。本研究为进一步了解野鸟携带NDV与家禽NDV传播、暴发之间的联系提供了依据。
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新城疫强毒特异性反转录荧光定量PCR检测方法的建立与应用
《山东农业科学 》 2021
摘要：为建立一种敏感性高、特异性强、成本更低的新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）特异性反转录荧光定量PCR（reverse transcription fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR）检测方法,基于对所有已知NDV F基因序列特征的分析,设计了一对强毒特异性引物,以体外转录制备的RNA标准品为阳性模板,构建了标准曲线,并对该方法的敏感性、特异性和准确性进行了验证。结果表明,基于SYBR GreenⅠ嵌合荧光技术建立的检测方法能够特异性扩增NDV强毒,最低可检测1拷贝/μL的RNA,用于临床毒株的检测结果与序列测定一致,可作为适合大规模监测NDV强毒的方法和工具。
关键词： 新城疫病毒 强毒 反转录荧光定量PCR 监测
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鲁西南地区4种鸭源重要病毒感染的调查与分析
《家畜生态学报 》 2020 北大核心
摘要：为了解鲁西南地区养鸭区域重要疫病病毒的感染状况与流行趋势,对2019年采集的740份样品进行了流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、坦布苏病毒(TMUV)和鸭病毒性肝炎病毒(DHV)4种病原的PCR检测.结果 显示,AIV、NDV、TMUV和DHV的阳性率分别为40.27%、13.78%、17.30%和6.76%;AIV和NDV在第2和第3季度的阳性率高于第1和第4季度,TMUV的阳性率在第1季度和第4季度较高,DHV的检出率在各时间段内起伏不大;有15.14%的样品存在混合感染,其中AIV/NDV、AIV/TMUV、AIV/DHV的混合感染较多,阳性率分别为7.58%,2.7%和2.16%.研究结果能够为该地区鸭主要疫病流行状况的诊断和防控措施的制定提供可靠依据.
关键词： 流感病毒 新城疫病毒 坦布苏病毒 鸭病毒性肝炎病毒 感染
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两种过硫酸氢钾复合物对禽流感病毒和新城疫病毒的灭活效果观察
《中国消毒学杂志 》 2019 北大核心
摘要：目的观察过硫酸氢钾复合盐对禽流感病毒和新城疫病毒的灭活效果.方法采用鸡胚培养法,对2种过硫酸氢钾复合物灭活禽流感病毒和新城疫病毒的效果进行观察.结果用浓度为313 mg/L的复方过硫酸氢钾复合盐水溶液对悬液内H9N2型禽流感病毒作用5 min可达到完全灭活.用浓度为1 250 mg/L的复方过硫酸氢钾水溶液对悬液内新城疫病毒作用10 min可达到完全灭活.结论 2种复合过硫酸氢钾粉剂对禽流感病毒和新城疫病毒均具有良好的灭活效果,新城疫病毒对该消毒剂的抗力稍强于禽流感病毒.
关键词： 过硫酸氢钾复合盐 禽流感病毒 新城疫病毒 灭活效果
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一株基因10型Ⅰ类新城疫病毒P基因的遗传进化分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：为探讨新城疫病毒(NDV)P基因及其编码蛋白的遗传进化特性,了解野鸟源NDV的基因变异情况,本研究对我国首次分离的野鸟源Ⅰ类NDV分离株SD18/13的P基因进行了测序,并从Gen Bank中选取不同基因型毒株的P基因序列进行遗传进化分析。结果表明,SD18/13 P基因开放阅读框全长1 200 bp,编码399个氨基酸,与Ⅰ类NDV的氨基酸同源性为83.5%~98.5%,与Ⅱ类NDV的氨基酸同源性为67.2%~70.5%。SD18/13与法国分离株Teal/France/10010/2010聚于一簇,同属于基因10型Ⅰ类NDV,两者P基因的核苷酸同源性为98.2%,氨基酸同源性为98.5%。
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不同ELISA试剂盒与PCR法检测鸡新城疫病毒的比对试验与研究
《家禽科学 》 2018
摘要：分别采用A、B、C公司的商品化新城疫病毒ELISA检测试剂盒和PCR法对50份临床疑似新城疫病料进行新城疫病毒检测方法的比对试验与研究,其中以La Sota疫苗株作阳性对照,SPF鸡胚尿囊液作阴性对照。结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒的检测结果与PCR检测结果的阳性符合率分别为:94.1%、91.2%、85.3%;阴性符合率分别为:93.8%、87.5%、81.3%;阴阳性总体符合率分别为:92%、92%、84%。A、B、C三个公司的ELISA抗原检测试剂盒的检测时间分别为4、3、3h。产品价格分别为1800、1300、1100元。由此可以看出,间接ELISA法是一种检测结果准确,成本相对较低,省时省力,适用于大批量的新城疫病毒检测方法。与此同时,不同公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒在敏感性、准确性、试验时长和价格上均存在较大差异,综合分析,B公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒价格适中、敏感性高、准确性高,可以在临床上进行推广应用。
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中国禽源新城疫病毒(NDV)流行株F和HN基因的遗传演化和变异频率
《微生物学通报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】新城疫(ND)是中国流行最严重的疫病之一,对家禽业可造成巨大的经济损失,疫苗防控是控制ND的重要措施。新城疫病毒(NDV)流行株的遗传演化一直是研究NDV的焦点。本文利用分子信息学手段,通过比较近20年间NDV流行株不同基因型F和HN基因的分子特征和遗传变异频率,解析免疫压力下NDV的演化规律。【方法】利用Lasergene 7.1和MEGA5.1软件,选取本实验室89株NDV分离株,结合从Gen Bank下载的364株NDV流行株以及15株NDV经典毒株的基因序列,对其进行系统发育、分子特征和替代频率分析。【结果】系统发育表明,NDV已经演化为15个基因型。一致性比较显示,NDV流行株相同基因型之间核苷酸(氨基酸)高度同源,而不同基因型之间差异较大且存在明显的氨基酸变异积累。NDV基因型的分布与时间、地域密切相关,VII d亚型为中国NDV优势流行株。为评估NDV变异的频率,以Go/GD/QY/1997株(中国较早发生的基因VII亚型)为参照,1997-2015年间NDV的F/HN基因的年平均核苷酸(氨基酸)替代率为2.31×10~(-3)(2.26×10~(-3))/3.37×10~(-3)(2.35×10~(-3))。其中,1997-2001年(未使用基因VII型疫苗)F/HN基因核苷酸年平均替代率为4.72×10~(-3)/8.28×10~(-3);2002-2015年(疫苗使用后)为1.6×10~(-3)/1.84×10~(-3),显示出基因VII型疫苗在控制NDV变异速度方面具有明显的效果。【结论】生物信息学分析证实:研制出与NDV流行毒株相匹配的新型疫苗是控制当前NDV变异的关键。
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理化因素对我国新城疫病毒流行株感染力的影响
《中国病原生物学杂志 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：目的了解水环境的理化因素对国内新城疫病毒流行株感染力的影响,以及新城疫病毒强、弱毒株对理化因素耐受性差别。方法测定3株NDV强毒株和3株弱毒株在不同温度(20、37和54℃)、盐度(0、15和30g/L)和pH(4.4、5.4和7.4)条件下保存时,病毒的鸡胚半数感染量(EID50)随时间的动态变化。使用线性回归方程分析不同理化条件下病毒的感染持续期。结果对照组用磷酸盐缓冲液(pH 7.4和20℃)保存时,病毒EID50保持相对稳定,RT(病毒感染力降低90%所需天数)可达26.25~64.52d;在30g/L NaCl条件下,病毒RT为5.78~24.51d;在pH 4.4条件下病毒的EID50下降较快,RT在4.54~10.66d之间;在57℃条件下,病毒的EID50迅速下降,RT<1d。NDV强、弱毒株RT值相似。结论酸度增加和盐度增高可一定程度上缩短病毒在水中的存活时间,而水温增高则导致病毒感染力的迅速降低。病毒对理化因素的耐受力因毒株而异,但与病毒的毒力无关。因此可利用不利于病毒存活的理化因素如高温或化学品进行消毒,减少禽舍或环境中新城疫病毒的存在,阻断病毒传播。
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鸭源新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及与不同分离株的反应性
《山东农业科学 》 2017
摘要：为了制备鸭源新城疫病毒基因Ⅶ型毒株HN蛋白的单克隆抗体,将构建的原核表达载体p ET28(a)-HN转化BL21(DE3)进行原核表达,纯化HN重组蛋白,并免疫6周龄BALB/c小鼠,分离脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,克隆培养并筛选杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,并对其生物学特性进行了鉴定。结果显示,表达纯化的重组HN蛋白分子质量约为49 ku,用ELISA方法成功筛选出4株针对新城疫Ⅶ型毒株HN蛋白的单克隆抗体,其中2H7抗体抗原谱较广,具有中和活性,为进一步研究HN蛋白功能和临床诊断奠定了基础。
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