科研产出
羊栖菜多糖抗A型塞内卡病毒感染PK-15细胞活性和机制探究
《山东农业科学 》 2024
摘要：研究羊栖菜多糖抗A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）感染PK-15细胞的活性及机制。首先采用水提法提取羊栖菜粗多糖，然后用不同孔径超滤膜将粗多糖分为不同分子量段；通过荧光定量PCR测定不同分子量粗多糖抗SVA活性，采用水提醇沉法将抗SVA活性最高分子量段的粗多糖进行纯化并测定其细胞毒性及抗SVA活性；通过在SVA感染周期不同阶段给药研究纯化多糖的抗SVA机制。结果表明，分子量越大的粗多糖抗SVA活性越强；多糖浓度和SVA浓度均与抗SVA活性呈现量效关系，纯化后的多糖对SVA（MOI=0.1）感染PK-15细胞的治疗指数为412,1 mg/mL的多糖对SVA(MOI=10-1～10~4)感染PK-15细胞病毒载量的抑制率在90%～99.999%之间；不同给药时间试验结果表明，多糖能在SVA吸附或穿入细胞以及病毒复制过程发挥抗病毒作用，其中抑制SVA吸附或穿入的活性最强。本研究分离纯化得到的羊栖菜多糖有很强的抗SVA活性，可为后续抗SVA药物的研发提供参考。
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绿原酸体外抗新型鸭呼肠孤病毒作用的研究
《农业生物技术学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)引起的NDRV病是困扰我国养鸭业的主要疾病之一.绿原酸(chlorogenic acid, CHA)作为许多中药的主要成分,在抗病毒方面发挥着重要作用.本研究拟明确CHA在NDRV感染幼仓鼠(Mesocricetus auratus)肾细胞系BHK-21不同阶段的抗病毒作用效果,为CHA抗NDRV的临床治疗提供参考依据.首先根据NDRV的S3基因序列(GenBank No. KJ879932)设计引物,建立NDRV实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR, qPCR)检测方法;然后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒测定CHA的细胞毒性,确定CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度;最后进行抗病毒试验,组Ⅰ向BHK-21细胞接种病毒NDRV,然后加入不同浓度的CHA,定期收集细胞冻融液;组Ⅱ的病毒吸附方式与组Ⅰ相同,用药前病毒NDRV先在BHK-21细胞上增殖10 h,定量检测增殖10 h后的病毒载量作为基值;以病毒增殖10 h为实验起始点,分别加入不同浓度的CHA,后续流程与组Ⅰ相同;以上两组均设置阴性和阳性对照.定期观察细胞病变,并将收集的样品进行NDRV的q PCR检测.结果显示,本研究建立的用于NDRV检测的qPCR方法最低检测限为92.5拷贝/μL;CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度为128μg/mL;CHA能在体外抑制NDRV增殖,存在明显的剂量效应关系.本研究可为NDRV的相关机制研究和实际应用提供基础资料.
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猪核糖核酸酶L基因真核表达载体的构建与表达
《畜牧与兽医 》 2016 北大核心
摘要：为了研究猪核糖核酸酶L(sRNase L)的抗病毒能力,利用pXJ41载体构建猪RNase L基因真核表达载体pXJ41-sRNase L,采用poly(I∶C)转染PK-15细胞刺激诱导sRNase L基因转录mRNA;根据Gen Bank上sRNase L基因编码区序列设计引物并加入真核表达增强序列Kozak序列,通过RT-PCR扩增sRNase L编码基因序列,并将其克隆至真核表达载体pXJ41,通过双酶切和测序鉴定重组质粒;将重组表达载体pXJ41-sRNase L转染Marc-145细胞,Western blot检测sRNase L在Marc-145细胞中表达。结果显示:成功扩增得到sRNase L基因全长;成功克隆至真核表达载体pXJ41并能够在Marc-145细胞中成功表达。结果表明:成功构建了真核表达载体pXJ41-sRNase L并在Marc-145细胞中实现了sRNase L的表达,为进一步研究sRNase L在猪体内先天性免疫中抗病毒能力及其机制提供了条件。
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