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绿原酸体外抗新型鸭呼肠孤病毒作用的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 潘力 1 ; 马秀丽 1 ; 黄中利 1 ; 李桂明 1 ; 唐亮 1 ; 于可响 1 ; 林树乾 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院家禽研究所

关键词： 新型鸭呼肠孤病毒;绿原酸;抗病毒;qPCR

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2020 年 004 期

页码： 754-760

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)引起的NDRV病是困扰我国养鸭业的主要疾病之一.绿原酸(chlorogenic acid, CHA)作为许多中药的主要成分,在抗病毒方面发挥着重要作用.本研究拟明确CHA在NDRV感染幼仓鼠(Mesocricetus auratus)肾细胞系BHK-21不同阶段的抗病毒作用效果,为CHA抗NDRV的临床治疗提供参考依据.首先根据NDRV的S3基因序列(GenBank No. KJ879932)设计引物,建立NDRV实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR, qPCR)检测方法;然后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒测定CHA的细胞毒性,确定CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度;最后进行抗病毒试验,组Ⅰ向BHK-21细胞接种病毒NDRV,然后加入不同浓度的CHA,定期收集细胞冻融液;组Ⅱ的病毒吸附方式与组Ⅰ相同,用药前病毒NDRV先在BHK-21细胞上增殖10 h,定量检测增殖10 h后的病毒载量作为基值;以病毒增殖10 h为实验起始点,分别加入不同浓度的CHA,后续流程与组Ⅰ相同;以上两组均设置阴性和阳性对照.定期观察细胞病变,并将收集的样品进行NDRV的q PCR检测.结果显示,本研究建立的用于NDRV检测的qPCR方法最低检测限为92.5拷贝/μL;CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度为128μg/mL;CHA能在体外抑制NDRV增殖,存在明显的剂量效应关系.本研究可为NDRV的相关机制研究和实际应用提供基础资料.

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