科研产出
CRISPR/Cas9基因编辑技术在作物中的应用
《核农学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：CRISPR/Cas9是由小导向RNA介导的基因组定向编辑技术。自2005年以来,该技术得到飞速发展,在生物学、医学和作物遗传育种等多个学科得到广泛应用。与以往的大范围核酸酶、锌指核酸酶（ZFNs）及类转录激活因子效应物核酸酶（TALENs）相比,CRISPR/Cas9技术具有独特的优越性,以其简便的操作和极高的编辑效率成为目前最主要的基因编辑技术。本文系统阐述了CRISPR/Cas9技术的起源发展、基因编辑特点,总结了该技术在作物基因编辑和其他方面的应用,旨在为利用该技术进行农作物种质创新、基因挖掘和育种提供参考。
关键词： 基因编辑 基因突变 作物遗传育种 CRISPR/Cas9
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大白菜抗/感干烧心材料CNGCs编码基因的差异解析
《山东农业科学 》 2017
摘要：在植物中,环腺苷酸门通道(CNGCs)蛋白由一个大的基因家族编码,其参与K+、Na+和Ca2+等阳离子的非选择性吸收和转运,其中钙离子(Ca2+)是植物生长发育必需的营养元素和信号调节因子。在大白菜中,Ca2+缺乏易造成干烧心的发生,不同大白菜品种对干烧心的易感程度存在显著差异。本研究以极端抗/感干烧心大白菜自交系He102与06-247为试材,采用全基因组重测序的方法筛选到了6个编码CNGCs的结构变异基因,分别是Bra003081、Bra022702、Bra032132、Bra024067、Bra021265、Bra031529,其分别与拟南芥CNGCs成员1、4、6、9、19、20同源。对6个大白菜CNGCs的潜在跨膜区进行了预测,发现这些CNGCs包含5~8个跨膜区域,C-端均位于胞质一侧。对编码蛋白氨基酸序列进行了比较,结果表明,来自06-247的Bra003081和Bra031529的C-端分别缺失389个氨基酸残基和多出43个氨基酸残基;Bra032132和Bra024067的变异也发生在06-247中,它们的C-端发生了2~3个氨基酸残基的插入或缺失;Bra021265和Bra022702的变异发生在He102中,前者是可变剪切,后者在N-端第31和第49氨基酸残基处分别缺失和插入一个氨基酸残基。易感干烧心材料06-247中四个突变CNGCs的突变位点都在编码蛋白的C-端,这有可能影响CNGCs的功能。该试验结果为下一步研究CNGCs基因功能、开发特异性标记、鉴定大白菜干烧心与CNGCs突变的关系奠定了基础。
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利用重建祖先基因方法研究连续诱导培养大肠杆菌对恩诺沙星抗药性突变的规律
《山东大学学报(医学版) 》 2012 北大核心
摘要：目的研究大肠杆菌对氟喹诺酮抗药性突变的规律及基因型与表型的对应关系。方法以质控菌株Escherichia coli ATCC 25922为初始菌株,恩诺沙星浓度由0.031 25μg/mL增加到128μg/mL,分步诱导得到13株稳定的抗药性菌株,检测氟喹诺酮靶酶基因gyrA、gyrB和parC、parE的序列及其突变位点,检测恩诺沙星的最低抑菌浓度(MIC)及抑制外排泵后MIC,分析抗药性表型与基因型、蛋白结构、外排泵及生化特性的关系。结果低浓度氟喹诺酮可诱导GyrA的Ser83-Leu和ParC的Glu84-Lys单一位点突变,致低水平抗药性,而Ser83-Leu逐步与Asp87-Gly、Glu84-Lys组合,导致氟喹诺酮突变决定区突变位点氨基酸的极性、空间位阻变化,影响靶蛋白与DNA和恩诺沙星的结合,可致高水平抗药性。外排泵与基因突变共同作用,使细菌耐受逐步升高药物浓度,M IC基本平行高出培养浓度1倍。结论增加恩诺沙星的使用剂量,能诱导高抗菌株产生,恩诺沙星抗药性表型与基因型具有对应关系和规律性变化。
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牛瓜氨酸血症、尿苷酸合酶缺乏症PCR-RFLP检测方法的建立及应用
《中国兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了解我国奶牛群中牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)、尿苷酸合酶缺乏症(Deficiency of uridine monophophate synthase,DUMPS)的携带和发生情况,根据已报道的ASS、UMPS基因核苷酸序列,设计2对引物建立了相应PCR-RFLP检测方法,并对表型正常的436头荷斯坦母牛及93头荷斯坦公牛进行检测。结果共检出CN、DUMPS杂合牛分别为8和6头,携带率分别为1.55%,1.17%,其中CN、DUMPS公牛杂合子分别为2和1头。
关键词： 牛瓜氨酸血症牛 尿苷酸合酶缺乏症 基因突变 PCR-RFLP
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鸡肾型IBV山东分离株核蛋白基因的遗传变异分析
《中国兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：应用RT-PCR方法扩增到了山东省2006—2007年分离的10株肾型IBV核蛋白(N)基因片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。结果发现,10株肾型IBV分离株核蛋白基因均含有1个长1230bp的ORF,编码由409个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。与GenBank中的20个IBV参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,发现10株肾型IBV分离株主要分布于2个群中。第Ⅰ群与弱毒疫苗株H120和参考毒株D41、D1466的亲缘关系较近,第Ⅱ群与参考毒株LX4、GDS14的亲缘关系较近。对核蛋白基因及其局部功能区序列比较发现,山东分离株与H120疫苗株核蛋白相比存在广泛的氨基酸变异,以点突变为主,突变位点无明显规律性。
关键词： 肾型传染性支气管炎病毒 核蛋白基因 基因突变
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牛脊柱畸形综合征检测方法的建立与应用
《遗传 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：牛脊柱畸形综合征(Complex vertebral malformation,CVM)是近年来新发现的致死性牛常染色体隐性遗传缺陷病。由于编码UDP-N-乙酰葡糖胺载体的SLC35A3基因发生G→T的突变而引起本病的发生,可引起胎牛死胎、流产、早产。为了解我国正常的荷斯坦牛(黑白花奶牛)的CVM携带和发生情况,建立、应用创造酶切位点PCR(Created restriction site PCR,CRS-PCR)、等位基因特异性PCR(Allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)检测方法检测了表型正常的436头荷斯坦母牛和93头荷斯坦公牛,检测到3头CVM携带者,其中杂合母牛1头,杂合公牛2头,携带率分别为0.60%、2.20%。此方法简便、可靠,为奶牛CVM有害基因的分型和筛选提供了新的方法和思路,为我国奶牛的分子选育提供了可靠的理论依据。
关键词： 脊柱畸形综合征 基因突变 AS-PCR CRS-PCR 荷斯坦牛
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昆虫乙酰胆碱酯酶基因变异抗药性机制研究
《昆虫知识 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的大量使用导致昆虫对其产生抗药性。乙酰胆碱酯酶是昆虫对这类杀虫剂产生抗性的重要的靶标酶,昆虫产生抗药性的重要原因之一,就是因为乙酰胆碱酯酶的基因表达量上升,或基因突变而导致其敏感性下降。文章简要论述昆虫乙酰胆碱酯酶基因发生变异而导致的抗药性,分析了变异对其结构和功能的影响。
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酯酶基因扩增及突变与昆虫抗药性
《昆虫知识 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的大量使用导致昆虫对其产生抗药性。酯酶是昆虫体内重要的解毒代谢酶,酯酶基因表达量上升和点突变使其代谢或结合杀虫剂的能力增强是昆虫对常用农药产生抗药性的2个重要原因。文章概述昆虫酯酶基因扩增及突变所导致的抗药性,进一步分析了酯酶突变对蛋白结构和功能的影响。
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