科研产出
FMDV3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用
《山东农业科学 》 2024 北大核心
摘要：本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用.根据GenBank序列合成 3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41 构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15 细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测 3D蛋白在细胞内的表达及定位.通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50 等试验检测HEK-293T细胞中过表达 3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响.结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制.本研究为深入探究 3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础.
关键词： 口蹄疫病毒 3D蛋白 真核表达 Ⅰ型IFN信号通路
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口蹄疫病毒3B蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备
《畜牧与兽医 》 2021 北大核心
摘要：为了深入研究口蹄疫病毒3B蛋白的结构及功能,本研究原核表达了3B蛋白并制备了针对3B蛋白的多克隆抗体。试验采用PCR方法扩增了口蹄疫病毒3B蛋白基因,并将其克隆到pET28a载体上,构建了重组质粒pET28a-3B,将其转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达。经过Ni-NTA琼脂糖亲和层析法初步纯化及Millipore超滤浓缩进一步纯化,将其免疫试验动物新西兰大白兔后制备出了抗3B蛋白的多克隆抗体。通过ELISA检测了该多抗的效价,Western blot试验检测了其反应性,通过间接免疫荧光（IFA）和Western blot试验检测了该多抗的应用性。结果表明:该抗体的效价为1∶512 000,反应性良好;IFA试验和Western blot试验中可以检测到过表达后定位于细胞核和细胞质中的3B蛋白,也可以检测到在真核细胞中过表达的3B蛋白。说明本研究制备的口蹄疫病毒3B蛋白多克隆抗体可以作为开展该病毒相关研究的重要材料。
关键词： 口蹄疫病毒 3B蛋白 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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FMDV3C蛋白抑制JAK-STAT信号通路的机制研究
《中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集 》 2014 CSCD
摘要：引言口蹄疫病毒(FMDV)感染宿主后能够引起宿主Ⅰ型IFN下调从而抑制宿主的先天性免疫应答。目前国内外针对这方面的研究主要集中于IRF3、NF-κκ3等Ⅰ型IFN产生的信号通路上~([1-3]),而对Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路尤其是JAK-STAT信号通路未见深入研究。本研究选取FMDV3C蛋白为研究对象,阐述了其抑制JAK-STAT信号通路的机制。
关键词： FMDV 信号通路 JAK-STAT 口蹄疫病毒 免疫应答 Luciferase 酶活性位点 核分离 等基因 碧云天
牛Mx1抗口蹄疫病毒作用的研究
《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集 》 2013 CSCD
摘要：为检测抗粘病毒基因(Myxovirus-resistant,Mx)的抗口蹄疫病毒功能,本研究构建了pEGFP-N1-Mx1真核表达载体,与对照质粒pEGFP-N1转染BHK21细胞,经G418筛选和WesternBlot检测,获得BHK21-Mx1细胞系和BHK21-N1对照细胞系,利用免疫荧光技术进行Mx1细胞定位和BHK21-Mx1、BHK21-N1的FMDV感染实验。结果表明,成功克隆了牛Mx1基因,构建了pEGFP-Mx1真核表达载体,获得了BHK21-Mx1和BHK21-N1细胞系,Mx1定位于细胞质中,BHK21-Mx1可抵御100TCID50病毒的攻击,BHK21-Mx1不同时间...
口蹄疫病毒感染机理及防控策略的研究进展
《家畜生态学报 》 2010
摘要：口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)可导致牛、羊、猪等发生口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD),该病毒有7种血清型,并具有高度变异性、适应性及持续感染特点,使得该病不能有效被控制而在许多国家和地区重新暴发和流行。论文对FMDV感染机理、口蹄疫难以防控的因素及目前常用的防制策略等方面进行了回顾,并对其研究前景进行了展望。
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口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体的构建及VP1基因稳定表达细胞系的建立
《中国农业科学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：【目的】构建口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1,并建立稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。【方法】采用RT-PCR技术从口蹄疫病毒材料中扩增出VP1基因,并将其连入慢病毒载体FG9中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,转染BHK-21细胞,96h后经流式细胞分选筛选GFP阳性细胞,细胞增殖后经WB检测VP1基因的表达。【结果】VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1测序正确,转染BHK-21细胞经流式细胞仪筛选的GFP阳性细胞后可稳定表达VP1基因。【结论】VP1基因重组慢病毒载体构建成功并获得了稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。
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