科研产出
鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒双重RT-PCR检测方法的建立及应用
《中国兽医科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：根据鹅星状病毒（GAstV)ORF1b基因与鹅源新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）σC基因的保守序列设计特异性引物，建立GAstV与NDRV双重RT-PCR检测方法，该方法具有较高的特异性，在903 bp(GAstV）和226 bp(NDRV）可检测到特异性条带，最低灵敏度为1.0×10~3copies/μL。在鲁中、鲁西北及鲁南地区不同规模的养鹅场中随机采取320份样本，GAstV的阳性率为21.56%(69/320),NDRV的阳性率为3.44%(11/320），混合感染阳性率为2.81%(9/320），单一RT-PCR结果与双重RT-PCR方法一致。该方法的建立为快速诊断GAstV和NDRV提供了可靠的手段。
关键词： 鹅星状病毒 鹅源新型鸭呼肠孤病毒 双重RT-PCR
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兔轮状病毒、兔肠冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
《中国兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：兔轮状病毒（lapine rotavirus, LaRV）和兔肠冠状病毒（rabbit enteric coronavirus, RECV）是引起兔腹泻的重要病原,2种病毒引起的仔兔腹泻症状极为相似。为建立能同时鉴别LaRV、RECV的方法,根据LaRV和RECV基因组的保守区段设计2对特异性引物,预期特异性扩增LaRV和RECV的片段大小分别为291 bp和163 bp,经优化反应条件,成功建立了LaRV和RECV的双重RT-PCR检测方法。特异性检测结果显示,能特异性的扩增出LaRV和RECV的目的条带,与兔瘟、大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门菌、泰泽菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、支气管败血波氏杆菌均无交叉反应;LaRV和RECV的最低检出限分别为2.73×105,1.22×104拷贝/μL,在相同条件下重复可获得一致的结果。对采自山东部分地区的107份兔腹泻样品的检测结果显示,LaRV和RECV的阳性率分别为10.28%和7.48%,两者与单一RT-PCR检测结果相一致。结果表明,所建立的双重RT-PCR方法能够快速、准确的对LaRV和RECV单一或混合感染的样品进行检测,为LaRV和RECV的鉴别诊断和流行病学调查提供新的技术手段。
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双重RT-PCR快速检测H7N9流感病毒方法的建立
《中国动物检疫 》 2015
摘要：为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐Gen Bank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型的双重RT-PCR。对H7N9亚型流感病毒核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增HA基因263bp、NA基因520 bp的特异性片段,而对其他常见亚型的流感病毒的RT-PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR方法的检测下限为3 pg的H7N9病毒模板。利用该双重RT-PCR方法对30份临床样品进行H7N9病毒进行检测,与病毒分离方法进行对比,结果显示,两者的符合率为100%。结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7N9流感病毒的同时检测和鉴别诊断,为H7N9亚型流感的有效防控提供技术支撑。
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双重RT-PCR方法检测花生条纹病毒和黄瓜花叶病毒
《花生学报 》 2012
摘要：为了建立花生条纹病毒(PStV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的双重RT-PCR检测方法,根据Gen-Bank中登陆的PStV和CMV的核苷酸保守序列分别设计特异性引物,以感病叶片总RNA反转录物为模板,建立了双重RT-PCR反应体系,并对双重RT-PCR的特异性和灵敏性进行了验证。结果表明:此方法能够特异地从感染PStV和CMV的样品中扩增出PStV(300bp)和CMV(1054bp)2个条带,与实验设计相符;扩增产物测序结果表明,PStV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为93%～99%,CMV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为90%～99%,证明了检测结果的准确性;该方法特异性良好,灵敏性与单一扩增相同,能够特异、灵敏、准确地检测花生CMV和PStV。
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牛轮状病毒与病毒性腹泻病毒的双重RT-PCR检测方法的建立
《家畜生态学报 》 2008
摘要：建立了能够同时检测牛轮状病毒(BRV)与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的双重RT-PCR方法。应用两对特异性引物进行了双重RT-PCR扩增,这两对引物分别对应于BRV的VP7基因和BVDV的5-UTR中的部分编码序列,其扩增产物分别为342bp和196bp。说明该方法的特异性强、敏感性高,可检测到1pg的病毒RNA,可应用于临床诊断和流行病学研究。
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