科研产出
兔轮状病毒VP8*蛋白原核表达、基因序列及蛋白特性分析
《畜牧与兽医 》 2023 北大核心
摘要：为深入研究兔轮状病毒VP8*蛋白的结构和功能，本研究利用生物信息学软件DNAStar对兔轮状病毒Z3171株的VP8*基因序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析，运用生物信息学方法对该蛋白的理化性质、亲/疏水性、磷酸化及糖基化位点、结构域、中和表位及三维结构等进行了分析。设计合成引物，采用PCR方法扩增VP8*蛋白编码基因，并将目的片段克隆到pET28a（+）原核表达载体，经体外原核表达，采用亲和层析纯化获得VP8*目的蛋白。结果显示：Z3171株的VP8*基因与国内外参考序列对比，核苷酸序列同源性为32.8%～90.3%,氨基酸序列同源性为39.2%～91.9%。生物信息学分析显示该蛋白理化性质稳定，无跨膜结构域，不含有信号肽，主要定位于细胞骨架中。其中1个中和表位区域内有2个氨基酸插入，该区域三维构象亦发生变化。PCR扩增的VP8*基因条带大小为558 bp,经测序与目的基因完全一致；经SDS-PAGE和Western blot鉴定，重组VP8*蛋白以可溶形式表达，血凝性试验结果表明该蛋白无血凝性。本研究为VP8*免疫原性分析及研制兔轮状病毒疫苗提供了参考。
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兔轮状病毒、兔肠冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
《中国兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：兔轮状病毒（lapine rotavirus, LaRV）和兔肠冠状病毒（rabbit enteric coronavirus, RECV）是引起兔腹泻的重要病原,2种病毒引起的仔兔腹泻症状极为相似。为建立能同时鉴别LaRV、RECV的方法,根据LaRV和RECV基因组的保守区段设计2对特异性引物,预期特异性扩增LaRV和RECV的片段大小分别为291 bp和163 bp,经优化反应条件,成功建立了LaRV和RECV的双重RT-PCR检测方法。特异性检测结果显示,能特异性的扩增出LaRV和RECV的目的条带,与兔瘟、大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门菌、泰泽菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、支气管败血波氏杆菌均无交叉反应;LaRV和RECV的最低检出限分别为2.73×105,1.22×104拷贝/μL,在相同条件下重复可获得一致的结果。对采自山东部分地区的107份兔腹泻样品的检测结果显示,LaRV和RECV的阳性率分别为10.28%和7.48%,两者与单一RT-PCR检测结果相一致。结果表明,所建立的双重RT-PCR方法能够快速、准确的对LaRV和RECV单一或混合感染的样品进行检测,为LaRV和RECV的鉴别诊断和流行病学调查提供新的技术手段。
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