文献类型： 会议论文
第一作者：
作者： 李俊 1 ;
作者机构： 1.李俊@山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南,250100--于周@山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南,250100 青岛农业大学,青岛,266109--徐绍建@山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南,250100--程凯慧@山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南,250100 青岛农业大学,青岛,266109--王金宝@山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南,250100--
关键词： 猪圆环病毒2型;感染性DNA;PK-15细胞系;体外拯救;PCR诱变技术
会议名称： 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
主办单位： 中国畜牧兽医学会
页码： 553-557
摘要： 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。pSK-PCV2中含有一个线性化PCV2全基因组,长1767bp,载体中PCV2从496nt开始,其起始位点(Ori)含有保守序列的茎环结构未被破坏;ds-PCV2为单个全基因自连产物。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中含有大量的病毒抗原;提取mRNA后经RT-PcR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17-20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。所构建的3种重组质粒均可表达并在体外组装出有感染性的PCV2病毒粒子,拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究在国内首次应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性、疫苗免疫及致病机理研究打下了基础。
分类号： S858.28:S852.659.2
- 相关文献
[1]猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救. 李俊,时建立,于周,徐绍建,丁鹏,程凯慧,王金宝. 2009
[2]PCV2a和PCV2b感染性克隆的体外拯救. 柳晓,钟辉,孙玉霞,李谦,邹榕凯,李俊,时建立,丛晓燕,孙文博,杜以军,吴家强,王金宝. 2012
[3]PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变及其真核表达载体的构建. 王鹏,张熙艳,时建立,徐绍建,丛晓燕,刘畅,彭喆,孙文博,杜以军,吴家强,王金宝,李俊. 2014
[4]PCV2、PRV、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用. 辛长勋,郑书轩,时建立,彭喆,吴晓燕,高梅,刘玉伟,王硕,王金宝,李俊. 2019
[5]猪圆环病毒2型Rep蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 高梅,彭喆,吴晓燕,时建立,辛长勋,郑书轩,刘玉伟,王硕,王金宝,李俊. 2018
[6]猪圆环病毒2型Cap蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化. 刘玉伟,辛长勋,孙盼盼,王硕,高梅,时建立,彭喆,吴晓燕,王永明,李俊. 2019
[7]猪圆环病毒2型特异性荧光定量PCR检测方法的建立与应用. 吴晓燕,刘涛,李俊,时建立,韩偲,刘洋,吴家强,周顺,王金宝. 2011
[8]猪圆环病毒2型滨州分离株全基因组的克隆与序列分析. 张文通,李峰,魏凤,苗立中,吴家强,沈志强. 2015
[9]PK-15细胞α干扰素效应因子qPCR检测方法的建立及其初步应用. 邹榕凯,李俊,时建立,柳晓,丛晓燕,孙文博,杜以军,吴家强,王金宝. 2013
[10]含CpG基序系列猪圆环病毒核酸疫苗的构建. 程凯慧,李俊,于周,周顺,王金宝. 2008
[11]6株猪圆环病毒2型山东分离株ORF2基因的克隆与序列分析. 王可,孙健全,孔文涛,孔健,孙芝兰. 2010
[12]PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建. 赵鸿雁,李俊,丛晓燕,曹帅,王文志,张秀美,王金宝. 2006
[13]猪圆环病毒2型SD2分离株ORF3基因转录分析. 丁鹏,李俊,于周,程凯慧,吴家强,王金宝. 2009
[14]含CpG基序的PCV-2的ORF2基因真核表达载体的构建. 曹帅,李俊,张祯涛,赵鸿雁,丛晓燕,张秀美,王金宝. 2006
[15]2株山东分离株PCV2的全基因克隆和序列分析. 李俊,王金宝,曹帅,赵鸿雁,丛晓燕,吴家强. 2006
[16]猪圆环病毒2型全序列分析及感染性克隆的构建. 徐绍建,李俊,时建立,张秀美,王金宝. 2010
作者其他论文 更多>>
-
猪圆环病毒1型、2型、3型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR鉴别方法的建立及应用
作者：田瑶;时建立;彭喆;李琛;徐绍建;吴晓燕;李佳昕;杨莹;王硕;刘畅;韩红;李俊;韩先杰
关键词：猪圆环病毒;特异性;敏感性;SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR
-
LAMP-LFD技术在检测猪圆环病毒3型中的应用研究
作者：王妍;时建立;彭喆;吴晓燕;王硕;孙盼盼;徐绍建;韩先杰;李俊
关键词：PCV3;LAMP-LFD;常规PCR
-
RNA病毒重组及发生机制
作者：李琛;时建立;彭喆;刘畅;徐绍建;韩红;吴晓燕;李俊
关键词：RNA病毒;重组机制;RNA依赖性;RNA聚合酶
-
猪圆环病毒1型LAMP检测方法的建立及初步应用
作者：田瑶;李佳昕;杨莹;王硕;时建立;彭喆;李琛;徐绍建;吴晓燕;刘畅;韩红;李俊
关键词：猪圆环病毒1型;环介导等温扩增技术;特异性;敏感性
-
PCV2感染后JAK-STAT信号通路的基因差异表达分析
作者：时建立;彭喆;吴晓燕;王硕;孙盼盼;王妍;李俊
关键词：猪圆环病毒2型(PCV2);JAK-STAT信号通路;PCR列阵;差异表达
-
PCV2、PRV、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用
作者：辛长勋;郑书轩;时建立;彭喆;吴晓燕;高梅;刘玉伟;王硕;王金宝;李俊
关键词：猪圆环病毒2型;猪伪狂犬病毒;猪细小病毒;多重PCR
-
猪圆环病毒2型Cap蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化
作者：刘玉伟;辛长勋;孙盼盼;王硕;高梅;时建立;彭喆;吴晓燕;王永明;李俊
关键词：猪圆环病毒2型;Cap蛋白;ORF2;原核表达;优化条件;纯化
