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大肠杆菌基受态细胞制备方法的优选

文献类型： 会议论文

第一作者： 温建新

作者： 温建新 1 ; 周顺 2 ; 黄保远 3 ; 董霜 3 ; 任慧英 2 ; 刘文华 4 ; 邹玲 2 ; 李迎军 2 ; 王金宝 5 ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院 山东泰安 271018,莱阳农学院动物科技学院,山东青岛 266109

2.莱阳农学院动物科技学院,山东青岛 266109

3.山东省巨野县畜牧局 荷泽 274900

4.莱阳农学院动物科技学院,山东青岛266109

5.山东省农业科学院济南250000

关键词： 大肠杆菌;感受态细胞;质粒转化;转化效率

会议名称： 第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会

主办单位： 中国微生物学会;山东大学微生物技术国家重点实验室;山东学微生物学会

页码： 98-103

摘要： 以大肠杆菌OH5a、JM109为受体菌，质粒DNA加入感受态细胞，经短暂冰浴和热休克后，直接涂布预热至37℃的平板或加入LB培养基，复活一定时间后涂板。研究不同型号的菌株、不同转化溶液、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的复苏时间等对质粒转化效率的影响。结果表明：以0.10mol/L,CaSO4溶液制备感受态细胞，冰浴转化30min，经42℃热休克，作用90s后，不复苏直接用无菌水进行8倍稀释，涂平板筛选转化子，可获得较好的转化效率，每微克(μ g)质粒DNA可以得到高达105个转化菌落。转化溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响，而转化时间、冰浴时间和转化后的振荡培养复苏时间对转化效率的影响不明显。

分类号： Q939.121`Q784

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