文献类型： 中文期刊

作者： 范阳阳 ¹ ; 张全芳 ² ; 刘艳艳 ² ; 谭晴晴 ² ; 胡悦 ² ; 朱天翼 ² ; 王文博 ² ; 步迅 ³ ;

作者机构： 1.山东农业科学院生物技术研究中心/山东省农业科学院应用生命科学实验室;韦兰学院;山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/山东省食品质量与安全检测技术重点实验室

2.;山东农业科学院生物技术研究中心/山东省农业科学院应用生命科学实验室;韦兰学院;山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/山东省食品质量与安全检测技术重点实验室

3.;山东农业科学院生物技术研究中心/山东省农业科学院应用生命科学实验室;韦兰学院;山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/山东省食品质量与安全检测技术重点实验室;

关键词： 环介导恒温扩增;金黄色葡萄球菌;鼠伤寒沙门菌;大肠杆菌O517:H7

期刊名称： 食品与药品

ISSN： 1672-979X

年卷期： 2017 年 06 期

页码： 381-387

摘要： 目的建立一种能快速准确检测牛奶中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌O517:H7(Escherichia coli O517:H7)的环介导恒温扩增方法(loop mediated isothermal amplification,LAMP)。方法以牛奶为研究对象,分别利用金黄色葡萄球菌nuc,鼠伤寒沙门菌invA和大肠杆菌O517:H7的rfbE保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应温度、时间等条件,建立检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应体系。并验证了本方法的特异性和灵敏度。结果 LAMP法对牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的灵敏度均为1.0×10~2拷贝/μL,比常规PCR灵敏度提高了10倍。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应条件为60℃、30 min,鼠伤寒沙门菌为60℃、60 min。利用SYBR Green I染料在紫外光下可直接观察检测结果,金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7阳性样品均呈绿色;进一步利用荧光定量PCR仪可检测到对应的扩增曲线。通过牛奶样品模拟掺杂实验,验证了方法的实用性和可靠性。结论本研究建立的检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点,可用于牛奶中相关致病菌的检测,对预防和控制3种致病菌的传染有重要意义。