文献类型： 中文期刊

作者： 谢红艳 ¹ ; 万鲁长 ² ; 黄春燕 ² ; 刘国霞 ² ; Jean-Fran?ois Picimbon ² ; 宫志远 ³ ;

作者机构： 1.山东省农业科学院农业资源与环境研究所农业部废弃物基质化利用重点实验室山东省农业面源污染防控重点实验室;山东省农业科学院生物技术研究中心

2.;山东省农业科学院农业资源与环境研究所农业部废弃物基质化利用重点实验室山东省农业面源污染防控重点实验室;山东省农业科学院生物技术研究中心

3.;山东省农业科学院农业资源与环境研究所农业部废弃物基质化利用重点实验室山东省农业面源污染防控重点实验室;山东省农业科学院生物技术研究中心;

关键词： 烟粉虱;气味结合蛋白;基因克隆;原核表达;纯化

期刊名称： 环境昆虫学报

ISSN： 1674-0858

年卷期： 2017 年 04 期

页码： 752-761

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR和RACE技术成功克隆烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA全长。BtabOBP2(Gen Bank登录号:AIS71883)和BtabOBP4(Gen Bank登录号:AIS71884)的cDNA序列全长分别为1107 bp和874 bp,完整开放阅读框(ORF)分别为744 bp和429 bp,分别编码247和142氨基酸,BtabOBP4有6个保守的半胱氨酸,属于典型OBP,而BtabOBP2除了具有典型OBP的6个半胱氨酸,增加了3个保守的半胱氨酸,属于Plus-C OBP。将得到的BtabOBP2和BtabOBP4重组到原核表达载体pET30a(+),转化入BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,用IPTG诱导融合蛋白表达。采用亲和层析和凝胶过滤层析纯化融合蛋白,并进行Western blot分析。结果显示,BtabOBP2和BtabOBP4融合蛋白在大肠杆菌中均有可溶性表达,Western blot结果证实所表达的融合蛋白确实为目的蛋白。BtabOBP2融合蛋白在SDS-PAGE中的表观分子量比预测的分子量大了6.53 k Da,用重组肠激酶切掉6×His标签后,目的蛋白的表观分子量与预测分子量相近,偏差降低,说明6×His标签是造成融合蛋白表观分子量偏差的原因。本研究明确了烟粉虱气味结合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的核苷酸、氨基酸序列特征,并成功进行了原核表达和纯化,为进一步研究这两个OBP基因的分子结构和功能奠定了基础。