文献类型： 中文期刊

作者： 陈正涛 ¹ ; 颜世敢 ² ; 张秀美 ³ ; 张琳 ³ ; 杨少华 ³ ; 许传田 ³ ; 胡北侠 ³ ; 郝明飞 ¹ ; 李建亮 ¹ ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院

2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省禽疫病防控与繁育重点实验室

3.山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防控与繁育重点实验室

关键词： 猪链球菌2型;溶血素;重组溶血素;原核表达;溶血活性

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2013 年 33 卷 06 期

页码： 861-866

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据猪链球菌2型(SS2)HA9801株溶血素(suilysin,SLY)基因全长序列设计引物,扩增SLY基因,与原核表达载体pET-28a连接,转入大肠杆菌Transetta(DE3)中诱导表达,收集表达菌体,超声破壁、镍柱纯化获得可溶性rSLY蛋白,电泳鉴定后测定rSLY的溶血活性及其溶血谱,系统研究温度、酸碱度、离子强度等理化因素对rSLY溶血活性的影响。结果表明,本试验建立的rSLY原核表达体系能高效可溶性表达具有溶血活性的rSLY,纯度达电泳纯,相对分子质量为54 000左右,100mL菌液诱导后能纯化出约8mg电泳纯的rSLY。rSLY具有高溶血活性,溶血比活为4 057HU/mg。rSLY对多种动物的红细胞有溶血作用,其中对猪、兔和豚鼠的作用最强。rSLY在4℃保存时溶血活性最稳定,保存48h后溶血活性不降低。在pH 6～7和离子强度为500mmol/L时溶血活性最高。本试验获得了高表达、可溶性、高溶血活性的rSLY,首次系统研究了不同理化因素对rSLY生物学活性的影响,为SLY致病机理深入研究及SS2亚单位疫苗和诊断试剂的研制奠定了基础。