科研产出
猪圆环病毒2型SD2分离株ORF3基因转录分析
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：对PCV2 SD2株(DQ478947)进行了序列分析发现,其含有11个开放阅读框,与以往分离株开放阅读框有较大差异。根据GenBank发表的PCV2序列设计特异性引物,扩增ORF3基因,预计扩增片段大小为209 bp。分别在接毒后12、24、364、8 h,用Trizol法自病毒细胞裂解液提取总RNA,然后用DNase I处理,除去残留的病毒DNA,利用醋酸纤维素分离mR-NA,用上述引物进行RT-PCR扩增。在接毒24 h后扩增出的目的片段大小与预计扩增片段大小相符合,测序结果表明扩增片段与PCV2 SD2(DQ478947)ORF3基因序列相符。由此证实,PCV2山东分离株ORF3基因可在接毒24 h后于转录水平表达,为ORF3基因的深入研究打下了基础。
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含CpG基序系列猪圆环病毒核酸疫苗的构建
《中国兽医科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：人工合成了系列含有1～24个长度不等、序列不同的CpG-ODN基序,经MluⅠ单酶切、连接后插入到已构建好的真核表达载体pVAX1-ORF2的骨架结构中。酶切及测序结果证实,所构建的系列载体正确,表明已经成功构建了系列含有CpG-ODN的表达ORF2编码蛋白的重组质粒pVAX1-ORF2-CpG,为进一步优化和筛选最佳猪圆环病毒核酸疫苗奠定了基础。
关键词： 猪圆环病毒2型 系列CpG-ODN pVAX1-ORF2 核酸疫苗
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PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建
《动物医学进展 》 2006
摘要：根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列,分别设计一对引物,应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经NheⅠ/EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-ORF2,RT-PCR产物ORF5经NotⅠ/XbaⅠ双酶切回收后插入pIRES-ORF2构建重组质粒pIRES-ORF2/ORF5。对此质粒中的插入片段,进行PCR RT-PCR及双酶切鉴定,同时对插入序列进行测序分析,表明SD1株ORF2与国内多种毒株的同源性为99%,pIRES-ORF2ORF5转移载体ORF5基因的核苷酸推导氨基酸与北美洲原型(VR-2332株)氨基酸同源性为99%。此重组表达载体的成功构建,为进一步研究PCV-2 ORF2及PRRSV ORF5编码蛋白的生物学活性及研究猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二联核酸疫苗奠定了基础。
关键词： 猪圆环病毒2型 ORF2 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 真核表达载体
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含CpG基序的PCV-2的ORF2基因真核表达载体的构建
《动物医学进展 》 2006
摘要：通过PCR扩增得到PCV-2的ORF2基因,将其插入到了真核表达载体pVAX1中,构建了重组质粒pVAX1-ORF2。作为免疫佐剂,一段150 bp的人工合成CpG-ODN被插入到了pVAX1-OFR2的骨架结构中,构建了含有CpG-ODN的表达ORF2编码蛋白的重组质粒pVAX1-ORF2-CpG。
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