科研产出
2020-2023年山东地区13株3型鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析
《中国家禽 》 2024 北大核心
摘要：为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况，试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料，通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定，并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示：共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒，均属于GⅠa分支，且分属于GⅠa分支不同小分支，其中2020年分离株（20148、20149）与2021年商品肉鸭分离株（SP21042）核苷酸相似性在98.8%～100%;2023年商品鸭分离株（SP23012、SP23014、SP-2、SP-3、SP23009）核苷酸相似性在99.7%～100%;2021年种鸭分离株（21083）与2022年、2023年种鸭分离株（22443、22468、BL23028）、2023年商品鸭分离株（SP23010）核苷酸相似性在98.8%～99.4%，小分支内相似性均高于98.8%，不同小分支间相似性在96.9%～98.2%;2023年部分3型DHAV分离株VP1基因出现了个别氨基酸位点的突变。研究表明，山东地区分离的13株GⅠa分支鸭甲型肝炎病毒VP1基因出现了变异，需要加以关注。
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鸭甲肝病毒1型和3型间接ELISA方法的建立与应用
《微生物学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)1型VP3和3型VP1串联基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测的间接ELISA方法。【方法】设计2对特异性引物,提取鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)的RNA,分别RT-PCR扩增得到714bp的DHAV-1VP3和720bp的DHAV-3 VP1基因,并克隆至p MD18-T载体中,然后依次将DHAV-1 VP3和DHAV-3 VP1定向插入p ET-32a(+)表达载体,获得重组表达载体p ET-1VP3-3VP1,进行IPTG(Isopropyl-beta-D-1-thiogalactopyranoside)诱导表达分析,以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并应用于临床。【结果】经IPTG诱导表达,在大肠杆菌中可稳定、高效地表达DHAV-1VP3-3VP1蛋白。Western blot检测结果表明,表达的重组蛋白与DHAV-1和DHAV-3阳性血清均能发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为1.0μg/孔,血清最佳稀释度为1∶200,临界值为OD6 50值≥0.38,建立的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与中和试验分别检测DHAV-3阳性血清,两种方法的符合率各为96.3%和96.7%;初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。【结论】以大肠杆菌表达的DHAV-1VP3-3VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于DHAV-1和DHAV-3抗体的检测。
关键词： 鸭甲肝病毒1型 鸭甲肝病毒3型 VP1基因 VP3基因 表达
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基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备
《浙江农业学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHVVP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。
关键词： 鸭肝炎病毒 基因C型 VP1基因 克隆表达 多克隆抗体
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