科研产出
鸡传染性喉气管炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
《山东农业科学 》 2024
摘要：鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)以往多感染蛋鸡,近年来在蛋种鸡、商品肉鸡中连续多发,表明该病毒感染谱有扩大风险,因此有必要加强对ILTV的监测.为建立高效、灵敏的ILTV检测方法,本研究以ILTV的TK基因为靶基因设计引物,扩增并构建pMD18-T-TK质粒标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线,对其特异性、敏感性和重复性进行验证,并对临床疑似病例进行检测.结果发现,该检测方法特异性良好,与其他常见症状相似病原无交叉反应;最低检测浓度为1.55拷贝/μL,灵敏度是普通PCR方法的10倍;重复性好,批内、批间变异系数在0.79%~1.83%之间.表明本研究建立的ILTV实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高,可为ILTV的临床诊断和流行病学研究等提供有效的检测方法.
关键词： 鸡喉气管炎病毒 TK基因 实时荧光定量PCR 特异性 敏感性 重复性
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猪圆环病毒1型、2型、3型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR鉴别方法的建立及应用
《中国动物传染病学报 》 2023 北大核心
摘要：猪圆环病毒(PCV)包括猪圆环病毒1型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3).近些年来,PCV1、PCV2、PCV3基因型之间存在共感染,因此建立一种快捷、特异、敏感的PCV1、PCV2、PCV3的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR鉴别检测方法显得尤为必要.本试验通过特异性引物筛选,各项反应条件优化,建立了实时荧光定量PCR鉴别方法.结果表明:PCV1、PCV2、PCV3检测下限分别为40.3、25.2、22.4 copies/μL.与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)均无交叉反应.批内及批间变异系数均小于1%.对98份PCV疑似阳性病料检测结果表明,PCV1、PCV2、PCV3感染率分别为10.2%、65.3%、53.1%,共感染率为7.1%.该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为PCV1、PCV2、PCV3的早期检测、定量检测及后期研究提供了技术手段.
关键词： 猪圆环病毒 特异性 敏感性 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR
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猪圆环病毒1型LAMP检测方法的建立及初步应用
《山东农业科学 》 2021
摘要：为建立猪圆环病毒1型（PCV1）环介导等温扩增（LAMP）检测方法,为现场诊断提供技术支持,本试验根据GenBank公布的PCV1全基因组序列,在其保守区设计了4条特异性LAMP引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样本检测,首次建立了PCV1的LAMP检测方法。结果表明,62℃水浴60 min为最佳反应条件;LAMP的检出限为1×101 copies/μL,普通PCR最低检测限为1×103 copies/μL;对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）进行扩增,结果显示为阴性;应用该方法对103个临床疑似病料进行检测,阳性率为34.0%（35例）,普通PCR阳性率为29.1%（30例）,两种检测方法符合率为89.5%。本试验为PCV1临床检测提供了一种特异、快速、成本低廉的方法。
关键词： 猪圆环病毒1型 环介导等温扩增技术 特异性 敏感性
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山东稻区二化螟对6种药剂的敏感度研究
《北方水稻 》 2018
摘要：为明确山东省不同稻区二化螟对不同类型杀虫剂的敏感性水平,筛选出绿色、高效的杀虫剂,采用人工饲料药膜法测定了山东省代表性稻区二化螟对6种杀虫剂的敏感度。结果表明,东营、济南、济宁、临沂稻区的二化螟对甲维盐、印楝素的敏感度最高,对阿维菌素、氯虫苯甲酰胺、苏云金杆菌的敏感度较高,对毒死蜱的敏感度较低。临沂稻区二化螟对氯虫苯甲酰胺的敏感性指数是东营稻区的1.58倍,济宁稻区二化螟对毒死蜱的敏感性指数是东营稻区的1.56倍;四个稻区二化螟种群对其它4种药剂的敏感度差别不大。
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苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联的敏感性
《果树学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】检测我国主要苹果产区田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联3种杀菌剂的敏感性现状。【方法】采用菌丝生长速率法,检测了我国6个省份的106株苹果轮纹病菌对3种杀菌剂的敏感性,采用Spearman’s秩相关系数法对3种杀菌剂的敏感性分别进行两两相关分析,比较了不同省份苹果轮纹病菌对同一种杀菌剂的敏感性差异。【结果】甲基硫菌灵对苹果轮纹病菌的EC50值介于0.814 5~10.700 8 mg·L~(-1),平均为(3.357 9±0.160 7)mg·L~(-1),敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵仍然较为敏感。克菌丹的EC50值介于1.672 2~38.487 3 mg·L~(-1),呈不连续单峰曲线,有敏感性下降的菌株XY7(采自河南信阳,EC50为38.487 3 mg·L~(-1))出现。剔除该菌株后,剩余105个菌株对克菌丹的敏感性频率分布呈连续偏正态分布,EC50平均值为(10.268 1±0.460 0)mg·L~(-1),可建立田间苹果轮纹病菌对克菌丹的敏感基线。代森联的EC50值介于1.276 3~32.132 4 mg·L~(-1),平均为(15.511 9±0.710 7)mg·L~(-1),敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,可建立田间苹果轮纹病菌对代森联的敏感基线。相关性分析结果表明,甲基硫菌灵和代森联、克菌丹和代森联之间的敏感性不存在相关性,但甲基硫菌灵和克菌丹的敏感性呈显著正相关。不同省份苹果轮纹病菌对同一种杀菌剂的EC50平均值不存在明显差异(P>0.05)。【结论】田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联的敏感性水平相对较高,并建立了田间苹果轮纹病菌对克菌丹和代森联的敏感基线。
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鸡传染性支气管炎病毒SYBR Green Ⅰ Real-time RT-PCR检测方法的建立及应用
《黑龙江畜牧兽医 》 2017 北大核心
摘要：为了建立一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法,试验以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了IBV SYBR GreenⅠReal-time RT-PCR检测方法对其进行研究。结果表明:该检测方法的标准曲线线性关系良好,相关系数(R2)为0.998 8,可检测到7.5×103copies/μL的病毒核酸,与其他禽源病毒不发生交叉反应,重复性试验变异系数小于3%。说明该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可用于IBV的定量检测。
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒(IBV) 实时荧光定量RT-PCR 敏感性 特异性 重复性
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苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性及其抗性突变体的致病力
《植物保护 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为明确苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性及其抗性突变体的致病力,采用菌丝生长速率法测定了130株苹果轮纹病菌菌株对戊唑醇的敏感性,采用药剂驯化和紫外线诱导的方式获得抗性突变体,并研究其生存适合度。结果表明,戊唑醇对130个菌株的EC50分布在0.051 6~1.925 4μg/mL,均值为(0.799 6±0.039 1)μg/mL,表明苹果轮纹病菌开始出现敏感性下降的亚群体。供试苹果轮纹病菌菌株的抗性频率为71.54%,各省份均未出现高抗菌株。药剂驯化、紫外诱导共获得3株抗性倍数分别为58.82倍、41.60倍、38.19倍的高抗菌株。抗性突变体致病力、适合度指数与敏感菌株相比没有显著性差异。无药培养9代后,各抗性突变体EC50逐渐下降,所获抗性可能不能稳定遗传。表明苹果轮纹病菌对戊唑醇的抗性在田间自然选择压力下可能会逐渐降低。
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苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性检测
《果树学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确苹果轮纹病菌对二甲酰亚胺类杀菌剂腐霉利的敏感性现状,建立敏感基线。【方法】采用菌丝生长速率法,测定了采自山东、辽宁、河北、河南、山西和陕西等地的106株苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性,比较了不同省份苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性差异。【结果】腐霉利对供试的106个苹果轮纹病菌菌株的EC50值差别不大,在0.327 0~3.322 8 mg·L-1,平均EC50为(1.289 1±0.060 0)mg·L-1,呈连续性偏正态分布,可以作为田间苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感基线。其中,陕西省的苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感程度最高,其他依次为山西省、河北省、辽宁省和河南省,山东省的敏感性最低,山东省的EC50平均值是陕西省2.63倍。【结论】田间苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感性水平较高,未发现敏感性下降的抗药性群体,所测得的EC50平均值可作为苹果轮纹病菌对腐霉利的敏感基线。
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猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
《中国畜牧兽医 》 2016 北大核心
摘要：试验根据猪链球菌2型荚膜多糖(CPS)抗原设计CPS2J基因特异性引物,建立猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法的标准曲线为y=-3.073x+36.87,r=0.995,熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示,该方法可以检测出模板最低浓度为1.0×101拷贝/μL,是普通PCR的10倍;特异性试验显示,对猪链球菌2型具有良好的特异性,能够区分其他血清型猪链球菌和其他细菌;重复性试验变异系数为0.37%~0.63%,均低于2.5%。临床检测显示该方法的敏感性明显高于常规PCR方法和细菌分离的方法。以上结果表明,本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好,有利于对猪链球菌2型的快速检测。
关键词： 猪链球菌2型 实时荧光定量PCR 敏感性 特异性 重复性
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