科研产出
甜樱桃砧木PcMPK3基因启动子的克隆及对病原菌感染的响应
《果树学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探明PcMPK3基因的表达调控规律。【方法】利用染色体步移技术从甜樱桃矮化砧木Gisela 6中克隆PcMPK3基因的启动子序列PcMPK3pro。利用Neural Network Promotor Prediction、softberry、PLACE和PlantCARE网站在线预测PcMPK3基因的基础启动子、转录起始位点和顺式作用元件。将PcMPK3pro定向替换植物表达载体pBI121-SN1的CaMV35S组成型启动子,构建重组表达载体pBI-PcMPK3pro:GUS,瞬时转化烟草叶片。【结果】结果表明,PcMPK3pro含有启动子核心元件TATA-box和CAAT-box等多种响应胁迫的顺式作用元件。受病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000,Pst DC3000)侵染,PcMPK3pro能驱动GUS报告基因表达且GUS酶活性显著提高。【结论】推测PcMPK3基因参与植物响应病原菌感染的胁迫过程。
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樱桃矮化砧木‘吉塞拉6号’基因转化体系的建立
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：采用‘吉塞拉6号’甜樱桃矮化砧木(Prunus cerasus×P.canescens)离体叶片外植体,在再生培养基附加生长素的条件下通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(p35SGUS intron)介导研究了β-葡萄糖醛酸酶基因(GUS)的瞬时表达、稳定表达和转基因植株再生,证明了培养基中生长素(IBA或NAA)的存在可促进基因转化,转化效率比对照提高2倍以上。将500个叶片外植体与EHA105(p35SGUS intron)株系在含有生长素的培养基中共培养,获得了11个转基因株系。采用PCR分析和South-ern Blotting核酸杂交,确定GUS基因已整合到矮化砧木‘吉塞拉6号’植株的染色体上。组织化学染色确定了GUS基因在植株体内的表达。
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提高苹果基因转化效率的研究
《果树科学 》 2000 北大核心 CSCD
摘要：采用根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｉｎｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β-葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下，外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３－４倍，而共培养两周后稳定表达水平提高２倍以上，产生９．８个ＧＵＳ愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化，白化处理的新梢顶端第一节间外植体ＧＵＳ表达区域比常用的叶片外植体高４倍。在生长素存在的条件下 ２％外植体获得了转基因植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ＢｌｏｔＤＮＡ杂交和组织化学染色分析证明ＧＵＳ基因已整合到苹果的染色体上，并得以表达。
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培育苹果转基因植株的研究
《落叶果树 》 2000
摘要：采用“皇家嘎拉”苹果（ Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ） 白化茎段外植体，通过根癌农杆菌（ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ ｍｔｕ ｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＨＡ１０５（ｐ３５ＳＧＵＳｉｎｔ） 介导，证明了培养基中存在生长素可促进基因转化，转化效率比对照提高２倍以上。将外植体与ＥＨＡ１０１（ｐ３５ＳＧＵＳ） 株系在含有生长素的培养基中共培养，获得了转基因植株。采用ＰＣＲ 分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ 核酸杂交，确定ＧＵＳ 基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了ＧＵＳ 基因在植株体内的表达。
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