科研产出
桦褐孔菌口服佐剂对禽类疫苗的体液免疫增强作用研究
《安徽农业科学 》 2024
摘要：为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation product, IOFP)作为禽类疫苗佐剂的适用性，选择商品化禽流感灭活疫苗和鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗分别免疫SPF鸡和SPF鸭，并饲喂含0.8%IOFP的饲粮，同时设置饲喂商品化饲粮的对照组。在免疫后不同时间点采集鸡和鸭的外周血，分离血清后分别测定禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)特异性血凝抑制(hemagglutinin inhibition, HI)抗体、鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus, DTMUV)特异性抗体及二者中和抗体效价。使用统计学方法评价IOFP对机体体液免疫反应的影响。鸭免疫后28 d使用DTMUV强毒株攻毒，持续检测泄殖腔排毒量，以确定IOFP对DTMUV排毒量的影响。结果显示，IOFP作为口服佐剂能够显著提升AIV、DTMUV疫苗抗体和中和抗体水平，特别是对免疫早期抗体的改善效果尤为显著。此外，添加IOFP还能够减少DTMUV的排毒量，缩短排毒时间。由此可见，IOFP是一种禽类病毒性疫苗普遍适用的口服佐剂，对于缩短免疫“空窗期”、提升疫苗保护效果具有较好的改善作用。
关键词： 桦褐孔菌发酵产物 禽流感病毒灭活疫苗 鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗 抗体 中和抗体
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明小花蝽卵黄原蛋白的鉴定及表达分析
《山东农业科学 》 2024
摘要：本研究对明小花蝽Orius nagaii的卵黄原蛋白(vitellogenin, Vg)进行结构分析、原核表达、抗体制备以及时空动态表达分析，旨在为昆虫卵黄原蛋白的研究提供理论依据。用RACE方法克隆出OnVg基因全长，运用生物信息网站分析OnVg蛋白得出其具有3个保守结构域：脂蛋白N端结构域、未知功能结构域以及血管性血友病因子结构域。构建OnVg的原核表达载体pET-32a-c(+)-OnVg,转至大肠杆菌进行诱导表达，通过免疫昆明小鼠制备了anti-OnVg抗体。Western blot结果显示anti-OnVg抗体与OnVg蛋白能够特异性结合。qPCR检测Vg基因在明小花蝽若虫、成虫阶段和成虫不同组织中的时空动态表达，结果表明Vg基因在若虫阶段最低，成虫阶段表达量升高且3 d时表达水平达到最高；成虫腹部表达量最高，其次是肠道和卵巢。本研究结果可为探究明小花蝽的生殖调控机理提供理论支持。
关键词： 明小花蝽 卵黄原蛋白 原核表达 抗体制备 时空表达
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11种牛分枝杆菌抗原在牛结核病诊断中的初步评价
《中国畜牧兽医 》 2018 北大核心
摘要：为筛选及评价用于牛结核病诊断的抗原,本试验将CFP-10、ESAT-6、TB10.4、TB27.4、MPT51、MPT63、MPT64、MPB70、MPB83、Rv3872和Ag85B共11种牛分枝杆菌抗原分别作为包被抗原建立间接ELISA方法,比较其对牛结核病的检出率;同时利用豚鼠和牛的皮试试验评价重组蛋白作为皮试试验刺激原的潜力。此外,将重组蛋白分别刺激结核病阳性牛和阴性牛的抗凝血24h,检测血浆中的IFN-γ水平,评价各重组蛋白作为IFN-γ释放试验刺激原的潜力。结果显示,不同重组蛋白对结核病阳性血清的反应活性不一,MPB70总检出率最高,为59.7%;其次是Ag85B、ESAT-6和MPB83,检出率均在45%以上;MPT51的检出率最低,仅为2.2%。豚鼠和牛皮试试验均显示,单个重组蛋白作为刺激原难以产生令人满意的迟发型过敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH),而TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63或Rv3872作为补充抗原,分别与CFP-10或ESAT-6混合,均可特异性地刺激结核病阳性牛产生较强的DTH反应,且与PPD-B无显著差异(P>0.05)。重组蛋白CFP-10、ESAT-6、TB10.4和MPT51均能刺激结核病牛全血释放一定的IFN-γ,其中CFP-10、CFP-10-ESAT-6串联蛋白和MPT51刺激结核病阳性牛全血释放的IFN-γ显著高于阴性牛(P<0.05)。因此,这11种牛分枝杆菌抗原并不适合单独用于牛结核病的血清学诊断、皮试试验或IFN-γ释放试验,但以CFP-10和ESAT-6为核心,TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63、Rv3872或MPT51作为其补充抗原,均能提高检测敏感性,有作为皮试试验和IFN-γ释放试验特异性刺激原用于牛结核病诊断的潜力。
关键词： 牛分枝杆菌 牛结核病 诊断 抗体 皮试试验 IFN-γ释放试验
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山东省规模化猪场四种病毒性疾病的抗体检测
《家畜生态学报 》 2016 北大核心
摘要：为及时了解山东省规模化猪场重大病毒性疾病的抗体水平,试验采用进口ELISA试剂盒,分别对山东省不同地区7个规模化猪场分别送检的共224份血清进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒及猪圆环病毒的抗体检测。结果显示:7个规模化猪场猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒病的抗体阳性率分别在20.00%~87.50%、5.00%~93.10%、38.89%~100.00%之间;猪伪狂犬病野毒感染率为0.00%~88.89%,经SPSS 19.0软件分析知7个不同猪场之间各种疾病的抗体阳性率均存在显著差异性(P<0.05)。根据以上数据对猪场四种病毒性疾病的抗体水平进行分析,为制定完善的免疫防控方案提供重要的依据。
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复方多肽核酸溶液对雏鸡免疫增强作用的研究
《山东农业科学 》 2014
摘要：对7日龄健康雏鸡免疫前24 h按照分组分别使用复方多肽核酸溶液和生理盐水,然后以新城疫克隆30弱毒苗点眼滴鼻,在免疫后7、14天心脏采血,采用HI法检测新城疫抗体水平。结果表明:应用复方多肽核酸溶液及新城疫克隆30弱毒苗后各试验组7天抗体水平明显升高,14日龄、21日龄抗体水平经t检验,试验组与对照组组间差异显著(P<0.05),试验组间差异不显著(P>0.05)。14日龄时各试验组外周血T细胞值与对照组差异显著(t>1.96,P<0.05)。21日龄时各试验组外周血T细胞值与对照组差异极显著(t>2.57,P<0.01)。研究结果显示复方多肽核酸溶液是一种很有前途的生物免疫增强剂。
关键词： 复方多肽核酸溶液 体液免疫 细胞免疫 α-醋酸萘酯酶法 抗体 T细胞比例
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外源性新城疫和禽流感抗体在SPF鸡体内的动态消长规律
《家禽科学 》 2013
摘要：选取2月龄SPF鸡100只,随机分组,分别设接种(肌注和口服)、攻毒保护和对照(正常和发病)组。检测SPF鸡接种不同接种途径、时间等血清中新城疫(Newcastle disease virus,NDV)和禽流感(Avian influenza virus,AIV)不同亚型(H5、H9N2)抗体滴度的变化,进而探讨不同抗体在体内的消长规律。结果表明:肌肉注射组的ND、H5(RE-4和RE-6)和H9N2抗体在注射后14d内,每天的抗体水平均显著高于对照组(P<0.01),且注射后抗体滴度在24h内达到峰值,高水平抗体至少可维持5d。口服抗体效果较差。动物攻毒试验表明,抗体对NDV具有较好的保护效果。
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人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)(1354-1802)的原核表达及抗血清制备
《安徽农业科学 》 2012 北大核心
摘要：[目的]制备人组织型纤溶酶原激活剂t-PA(1354-1802)抗血清,并测定其效价,为深入研究t-PA基因功能奠定基础。[方法]利用基因克隆技术获得t-PA(1354-1802)催化域基因片段,然后将其重组到pET-32a(+)质粒中,进行鉴定及序列分析;将测序正确的阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导、蛋白纯化及免疫兔试验。[结果]SDS-PAGE结果显示,37 kD处出现特异性条带;对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备t-PA蛋白抗血清,Western blot分析表明,抗血清可与标准品t-PA蛋白特异性结合,间接ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶12 800。[结论]成功制备了t-PA(1354-1802)抗血清,为t-PA基因功能的深入研究奠定了基础。
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布鲁菌在豚鼠和奶牛体内诱导的抗体水平和变态反应强度的相关性
《中国兽医学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：为探索布鲁菌在豚鼠和奶牛体内所引起的抗体水平和变态反应强度的相关性,分别用1×104,3×104CFU牛种布鲁菌强毒2308株各感染12只豚鼠,30 d后测定抗体滴度和变态反应强度。感染后35 d,扑杀豚鼠,取脾脏测定每克脾脏含菌量。用布鲁菌A19疫苗,以5×1010CFU皮下注射布病阴性荷斯坦奶牛50头,分别于免疫后15,30,60 d测定抗体滴度,并于免疫后45 d测定变态反应强度。运用SPSS 17.0-Analyze-Correlate-Bivariate Corre-lations程序分析试验数据,结果显示,不同剂量布鲁菌2308感染豚鼠后30 d所诱导的抗体水平、变态反应强度和克脾脏含菌量三者之间均无相关性。A19疫苗免疫奶牛后60 d的抗体水平与免疫45 d的变态反应强度呈正相关,免疫15 d和30 d的抗体水平和变态反应强度无相关性。豚鼠试验结果表明,抗体水平、变态反应强度与个体对布病的抵抗力均无相关性。
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