中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 cDNA的克隆与原核表达

焦寒伟; 王洪梅; 刘晓; 杜丽; 雷明; 张冬琳; 郝永昌; 成鹰; 何洪彬; 王凤阳; 《中国畜牧兽医 》 2012 北大核心

摘要：本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)基因,并用West-ern blotting进行鉴定。采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血白细胞中扩增MD-2cDNA,并将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经测序鉴定后,构建pET28a-MD-2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明,目的基因含有1个483bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;与黄牛、黑猩猩和小鼠MD-2的cDNA序列同源性分别为99.38%、77.02%、68.12%,氨基酸同源性分别为98.75%、65.00%和58.13%。融合蛋白以包涵体的形式存在,分子质量约为25ku。说明本研究成功克隆并表达了中国荷斯坦奶牛MD-2cDNA,为其进一步的功能研究提供了理论依据。

关键词： 中国荷斯坦奶牛 髓样分化蛋白-2 克隆 原核表达