科研产出
污水厂产超广谱β内酰胺酶大肠杆菌通过接合水平传递耐药性
《微生物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究废水中产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌中可移动质粒在耐药基因水平传播机制中的作用。【方法】对污水厂分离所得的50株产ESBLs大肠杆菌进行接合试验,并对所得的接合子采用纸片扩散法测定其对15种常见药物的耐药表型,针对质粒介导的产ESBLs菌株的耐药基因设计7对特异性引物对接合子进行PCR扩增。【结果】研究结果显示,80份水样分离得50株产ESBLs大肠杆菌,共接合成功35株细菌,接合成功率高达70%。接合子与供体菌相比,均发生耐药谱型的改变,且存在丢失一种或几种药物耐药性且产生另一种或几种药物耐药性的现象。PCR扩增结果显示,接合子与供体菌相比,耐药基因型有所减少或不变,bla_(TEM)、bla_(CTX-M)基因全部接合成功,bla_(SHV)基因仅1株未接合成功,耐氟喹诺酮类基因未发生转移。【结论】本研究表明,不同的耐药基因可能位于不同的可移动质粒上,可移动质粒在大肠杆菌耐药性水平传播的过程中起到了十分重要的作用。
关键词： 超广谱β-内酰胺酶 大肠杆菌 耐药基因 质粒 接合 水平传播
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大肠埃希菌质粒DNA提取方法的优选
《动物医学进展 》 2007
摘要：采用酚/氯仿少量提取法、异丙醇沉淀法、煮沸法以及微波炉法提取细菌质粒,然后分别对各种方法所提取的质粒进行琼脂糖凝胶电泳分析,并用紫外分光光度计测定其OD值,对其优劣性进行全面的分析。结果表明,异丙醇提取法所提取的质粒DNA纯度和产量高(其DNA片段荧光较强,具有清晰的亮带,OD260/OD280约为1.77,DNA样品浓度约为195μg/mL),且重复性好,具有结果稳定的特点,达到了分子生物学试验要求,适合大多数实验室使用。
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大肠杆菌质粒DNA提取方法的优选
《西南农业学报 》 2007 CSCD
摘要：采用酚/氯仿少量提取法、异丙醇沉淀法、简便快速的煮沸法以及微波炉法提取细菌质粒,然后分别对各种方法所提取的质粒进行琼脂凝胶电泳分析,并用紫外分光光度计测定其OD值,对各种方法的优劣性进行全面分析,结果表明异丙醇提取法所提取的质粒DNA纯度和产量高(其DNA片段荧光较强,具有清晰的亮带,OD260/OD280约为1.77,DNA样品浓度约为195μg/mL),且重复性好,具有结果稳定的特点,达到了分子生物学试验要求,适合大多数试验室使用。
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质粒DNA提取方法优选试验
《浙江农业科学 》 2007
摘要：采用酚/氯仿法、异丙醇沉淀法、煮沸法及微波炉法分别提取细菌质粒,琼脂糖凝胶电泳分析,紫外分光光度计测定OD值,对各种方法的优劣进行比较分析。结果表明,以异丙醇沉淀法提取的质粒DNA纯度和产量最高,且重复性好,具有结果稳定的特点;能够满足高水平的分子生物学试验要求,适合大多数实验室使用。
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大肠杆菌免疫刺激DNA的克隆及其对抗体产生的影响
《中国预防兽医学报 》 2002 北大核心 CSCD
摘要：利用聚合酶链式反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)从大肠杆菌基因组中扩增免疫刺激基因 ,并把扩增的基因片段克隆入pGEM_T载体。PstⅠ酶切结果表明重组质粒 (rP)均含有扩增的基因片段 ;rP1与rP2是相同的重组质粒。利用酶联免疫吸附试验检测了重组质粒对小鼠产生抗体的影响 ,结果显示 :重组质粒 1与牛血清白蛋白 (BSA) ,免疫小鼠能产生较高的抗体水平 ,而重组质粒 3则对小鼠产生的BSA抗体水平没有影响。对重组质粒 1的序列分析表明 ,克隆的基因片段中富含CpG序列 ,并含有数个具有强烈免疫刺激作用的RRCGYY(如 :AACGTT)序列。本研究为基因免疫机理的深入研究和基因免疫佐剂的开发奠定了基础
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