科研产出
基于ddPCR检测荷斯坦牛自由马丁现象的研究
《黑龙江动物繁殖 》 2022
摘要：为了鉴定异性双胎牛性器官发育紊乱疾病——牛自由马丁(freemartinism)综合征,试验选择7头中国荷斯坦异性孪生双胎的母牛进行微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测,并根据异性孪生母犊不孕的个体染色体为XX/XY嵌合、正常母牛染色体为XX来判定是否为嵌合体.结果表明:此7个样本均存在XX/XY染色体嵌合,均为异性孪生不孕母犊.说明ddPCR方法用于鉴定牛自由马丁现象是有效的.
关键词： 荷斯坦牛 自由马丁 微滴数字PCR(ddPCR) 外周血 嵌合体
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荷斯坦牛的牛奶脂肪酸影响因素分析及遗传参数估计
《中国畜牧杂志 》 2021 北大核心
摘要：本研究旨在对荷斯坦牛的牛奶脂肪酸指标表型以及遗传规律进行挖掘,为该性状的选择提供理论基础。本实验收集2019年12月到2020年7月山东及周边地区49个牧场30 016头健康荷斯坦牛的53 172条测定日记录,包含饱和脂肪酸（Saturated Fatty Acid,SFA）、不饱和脂肪酸（Unsaturated Fatty Acid,UFA）、单不饱和脂肪酸（Monounsaturated Fatty Acid,MUFA）、多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acid,PUFA）、棕榈酸C16:0（Palmitic Acid,PA）、硬脂酸C18:0（Stearic Acid,SA）、油酸C18:1 cis-9（Oleic Acid,OA）7种脂肪酸的预测表型信息,利用SAS的GLM过程进行多因素方差分析,探究对脂肪酸含量存在显著影响的环境因素;使用DMU软件估计各脂肪酸的遗传力及其之间的表型相关和遗传相关。结果显示,场年月、泌乳阶段、产犊月份、体细胞评分对各脂肪酸均存在极显著影响（P<0.01）,而胎次只对MUFA、OA、PUFA存在显著影响;各脂肪酸估计遗传力在0.04～0.10之间、估计重复力为中低水平（0.16～0.26）;各脂肪酸之间均呈正的中高遗传相关（0.32～0.97）;各脂肪酸之间表型相关范围为0.44～0.99,和遗传相关方向一致且多数性状间表型相关大于遗传相关。本研究结果显示牛奶脂肪酸比例存在遗传变异,说明荷斯坦牛脂肪酸性状有望通过选择进行遗传改良,获得的遗传参数为牛奶脂肪酸的选择提供了参考。
关键词： 荷斯坦牛 牛奶脂肪酸 FT-MIR 遗传力 遗传相关
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荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因克隆、原核表达及其抗菌活性分析
《中国农业科学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：【目的】实现荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组BNBD12的抗菌活性。【方法】RT-PCR扩增荷斯坦牛中性粒细胞BNBD12基因,序列分析后人工合成了适于在大肠杆菌中表达的BNBD12成熟肽,构建原核表达载体pET32a(+)/BNBD12,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过琼脂扩散法分别确定重组蛋白对牛源乳腺炎主要致病菌革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抗菌效果,应用扫描电镜观察重组蛋白的杀菌效应。【结果】测序结果表明扩增片段长度为180bp,可编码含60个氨基酸的成熟蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析显示人工合成的BNBD12的成熟肽基因以融合蛋白形式表达,表达量占菌体总蛋白的21.4%;纯化的重组蛋白0.05mg·mL-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有明显抑菌效果;扫描电镜观察发现重组蛋白作用后可引起病原菌内容物外泄而死亡。【结论】成功表达了荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素12,该重组蛋白既可作用于革兰氏阳性菌又可作用于革兰氏阴性菌,显示出较好的临床应用前景。
关键词： β-防御素12(BNBD12) 荷斯坦牛 表达 抗菌活性 乳腺炎
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荷斯坦牛红细胞Na~+-K~+-ATP酶的研究进展
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：作者对荷斯坦牛红细胞Na+-K+-ATP酶的分子结构和基本特征、分布、作用机制、调控机制、生理功能、影响因素及其与热应激的关系进行了综述。
关键词： 荷斯坦牛 Na+-K+-ATP酶 热应激
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荷斯坦牛κ-酪蛋白基因两SNPs位点基因型组合对产奶性状的影响
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用PCR-RFLP、CRS-PCR和DNA测序技术,对435头荷斯坦牛的κ-酪蛋白基因的外显子4和5上2个单核苷酸多态性(SNP)位点进行了研究。结果发现,在435头牛群中,共有8种基因型组合。单个SNP位点关联分析表明:T10996A突变位点3种基因型间TA基因型个体乳脂率极显著高于AA基因型个体(P<0.01),TA基因型个体乳蛋白率显著高于AA基因型个体(P<0.05)。T12980C突变位点的3种基因型间TC基因型个体乳脂率极显著高于TT基因型个体(P<0.01),TC和CC基因型个体乳蛋白率显著高于TT基因型个体(P<0.05)。T10996A/T12980C两种基因型组合分析中,在乳脂率上,TTCC基因型组合个体最高,TATC基因型组合个体位居第三位;在乳蛋白率上,TATC基因型组合个体显著高于AATT基因型组合个体(P<0.05)。κ-酪蛋白基因不同基因型和基因型组合与荷斯坦牛乳脂率和乳蛋白率存在相关性,但与产奶量和脂蛋白比不相关。
关键词： 荷斯坦牛 κ-酪蛋白基因 多态性 产奶性状 基因型组合
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牛脊柱畸形综合征检测方法的建立与应用
《遗传 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：牛脊柱畸形综合征(Complex vertebral malformation,CVM)是近年来新发现的致死性牛常染色体隐性遗传缺陷病。由于编码UDP-N-乙酰葡糖胺载体的SLC35A3基因发生G→T的突变而引起本病的发生,可引起胎牛死胎、流产、早产。为了解我国正常的荷斯坦牛(黑白花奶牛)的CVM携带和发生情况,建立、应用创造酶切位点PCR(Created restriction site PCR,CRS-PCR)、等位基因特异性PCR(Allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)检测方法检测了表型正常的436头荷斯坦母牛和93头荷斯坦公牛,检测到3头CVM携带者,其中杂合母牛1头,杂合公牛2头,携带率分别为0.60%、2.20%。此方法简便、可靠,为奶牛CVM有害基因的分型和筛选提供了新的方法和思路,为我国奶牛的分子选育提供了可靠的理论依据。
关键词： 脊柱畸形综合征 基因突变 AS-PCR CRS-PCR 荷斯坦牛
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荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素基因克隆及其原核表达质粒的构建
《畜牧与兽医 》 2007 北大核心
摘要：根据已发表的牛β-防御素基因序列设计引物,从具有临床乳腺炎症状的荷斯坦奶牛血液中性粒细胞中提取RNA,克隆牛β-防御素基因并插入到原核表达载体pQE-30中,构建了原核表达质粒pQE-30/β-defesion。测序结果表明,克隆的目的基因长189bp,编码1个氨基酸,与已报道的牛β-防御素氨基酸序列同源性达95.6%。本研究为牛乳腺防御素的表达及功能、活性的研究奠定了一定的基础。
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中国荷斯坦牛白细胞黏附缺陷症PCR-RFLP检测方法的研究
《生物技术通报 》 2007 CSCD
摘要：本试验根据已知牛染色体上CD18编码基因序列设计引物,提取牛血液和精液DNA,可扩增出338bp的DNA片段,将PCR产物克隆到pMD18-T载体中,对阳性重组质粒进行测序,确定为牛的CD18基因。由于CD18基因的383位碱基由A变为G,而引起牛白细胞黏附缺陷症(BLAD),通过对济南市11个奶牛场356头奶牛及53头荷斯坦种公牛进行了BLAD的PCR-RFLP检测,共检出3头杂合母牛(携带者),占检测母牛群的0.84%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者。
利用PCR-RFLP检测中国荷斯坦牛遗传缺陷——瓜氨酸血症
《生物技术通报 》 2006 CSCD
摘要：瓜氨酸血症(Citrullinemia)是荷斯坦牛尿素循环发生代谢紊乱的一种常染色体隐性遗传缺陷。精氨酸琥珀酸合成酶基因外显子5发生突变(C-T)对这一紊乱负责。本研究应用PCR-RFLP方法和DNA测序技术检测济南市周边120头荷斯坦母牛和山东奥克斯生物技术有限公司种公牛站50头荷斯坦公牛的精氨酸琥珀酸合成酶基因外显子5。结果发现,所检测的公牛未发现瓜氨酸血症突变基因携带者,母牛中有2头为携带者,携带频率为1.18%。
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利用分离的奶牛X精子冷冻精液生产体内性控胚胎试验
《动物医学进展 》 2006
摘要：采用常规精液和分离的X精子冷冻精液对115头超数排卵的青年和经产荷斯坦母牛人工输精生产体内性控胚胎。结果表明,利用2支和3支性控精液给超排青年母牛输精,头均分别获得6.8枚±4.8枚和6.3枚±3.2枚可用胚胎,与常规精液的超排效果(7.2枚±5.2枚)无明显差异;利用2支和3支性控精液给超排经产母牛输精,头均可用胚胎分别为7.5枚±4.5枚和8.6枚±5.6枚,与常规精液的超排效果(6.1枚±3.2枚)相比,分别增加23%(P>0.05)和41%(P>0.05),无显著差异,但解冻后性控精子会明显影响经产母牛的受精率;对用性控精液输精生产的12枚抽样胚胎采用LAMP法进行性别鉴定并移植,结果获得了91.7%的雌性率和36.4%的受胎率。结果提示,X精子的分离过程会在一定程度上影响受精率,用分离的X精子冷冻精液对超排母牛进行人工授精生产体内性控胚胎是可行的。
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