科研产出
苹果NADP依赖的苹果酸酶基因克隆、序列和表达分析
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]克隆苹果(Malus*domestica B.)中苹果酸代谢的关键酶基因MdNADP-ME,进行序列特征分析,研究MdNADP-ME在苹果中组织表达的情况.[方法]利用RT-PCR技术获得苹果MdNADP-ME1,2,3全长的cDNA序列.对该序列进行生物信息学分析,采用荧光实时定量PCR技术研究MdNADP-ME1,2,3的组织表达.[结果]测序结果显示,获得的3个NADP-苹果酸酶基因(MdNADP-ME1、MdNADP-ME2和MdNADP-ME3;GenBank登录号为JX971883、JX971884和JX971885),其ORF分别为1 512、1 782和1 926 bp,推测其分别编码503、593和641个氨基酸的多肽.氨基酸序列和结构分析显示,这3个基因均含有5个保守的氨基酸区域(motif I-V),含有2个功能结构域:malic和NADbind1malicenz.进化树分析结果显示,MdNADP-ME1和MdNADP-ME2属于双子叶植物细胞质NADP-ME型,MdNADP-ME3属于双子叶植物质体NADP-ME型.荧光实时定量PCR结果表明,MdNADP-ME1-3在被检测的组织中均有表达,但表达差异明显.[结论]MdNADP-ME1-3属于植物NADP-ME家族,结构高度保守,并且在苹果的不同组织中有不同表达模式.
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苹果NAD–苹果酸酶基因的克隆及在不同组织和果实发育阶段的表达分析
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：NAD-malic enzyme(NAD-ME)是植物调控苹果酸代谢中的关键酶。以富士苹果(Malus×domestica Borkh.)叶片为试材,通过同源比对和RT-PCR技术,克隆获得2个NAD–苹果酸酶基因(MdNAD-ME1和MdNAD-ME2)。其ORF分别为1 785 bp和1 818 bp,推测其分别编码595和605个氨基酸的多肽。氨基酸序列和结构分析显示,含有5个保守的氨基酸区域(Ⅰ~Ⅴ),包含2个功能结构域:malic和NAD_bind_1_malic_enz。进化树分析结果显示,MdNAD-ME1属于α组双子叶亚组,MdNAD-ME2属于β组双子叶亚组。荧光实时定量结果显示,MdNAD-ME在被检测的组织中呈组成型表达,且在多种组织中MdNAD-ME1表达量高于MdNAD-ME2。在富士苹果果实不同发育阶段,MdNAD-ME1与MdNAD-ME2具有不同的表达模式。以上结果表明,克隆得到的MdNAD-ME1和MdNAD-ME2属于植物NAD-ME,在苹果的生长和发育过程中MdNAD-ME1和MdNAD-ME2可能起到不同作用。
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