科研产出
猪流行性腹泻病毒变异株分离鉴定及攻毒模型建立
《生物学杂志 》 2023 CSCD
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种急性高度接触性肠道传染病。研究成功分离到一株PEDV,命名为PEDV-20200946。对该毒株的S基因进行测序分析，遗传进化树结果显示，该分离毒株属于G2亚群。通过Reed-Muench法测定该毒株毒价为106.1 TCID50/mL。通过动物回归试验进一步探究该分离毒株对仔猪的致病情况，将12头20日龄仔猪平均分为3组，分别为口服攻毒组、口服+肌注攻毒组和对照组。攻毒后观察临床症状，72 h后采集各组的粪便及发病猪的肠道进行RT-PCR检测和免疫组化分析。结果显示，口服+肌注组仔猪发病最快，口服攻毒组次之，对照未发病。剖检攻毒组仔猪可见其肠壁变薄、肠道膨胀，内含大量黄色液体。免疫组化试验显示，攻毒组猪小肠内可检测到大量PEDV阳性信号，而对照组未检测到。研究建立了PEDV-20200946毒株仔猪攻毒模型，为深入研究PEDV流行毒株的分子特性以及弱毒疫苗的开发奠定基础。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 流行毒株 分离鉴定 攻毒模型 遗传进化树
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猪流行性腹泻病毒变异毒株的分离鉴定及遗传演化分析
《生物学杂志 》 2022 CSCD
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起猪的一种急性高度接触性肠道传染病。为了解山东地区PEDV的遗传进化趋势，对2020—2021年收集的疑似猪流行性腹泻的临床病料进行RT-PCR检测。随后将处理好的病料上清液接种于Vero细胞进行PEDV病毒分离，并利用间接免疫荧光（IFA）进行验证，成功分离到一株PEDV毒株，命名为QH-202105。将分离株传代培养至第10代，提取RNA后进行扩增并全基因组测序，结合NCBI下载的参考序列对分离株的全基因组和S基因进行核苷酸同源性比对、系统发育树构建分析，结果显示，分离株与美国分离株USA/Colorado/2013核苷酸同源性最高，为99.1%,与CHM2013株同源性最低，为96.5%。经S基因氨基酸序列分析显示，分离株QH-202105在S基因的N端有60多处突变，两处氨基酸插入（包括第59～62位氨基酸的QGVN 4个氨基酸插入，第145位氨基酸N的插入）和两处氨基酸缺失（第115～118氨基酸的缺失，第167～168氨基酸的缺失）。进化树分析结果显示，分离毒株QH-202105为G2基因群，与CH/HNAY/2015和CH/ZJCX-1/2012亲缘关系最近，属同一进化分支。在此基础上，应用PROVEAN对QH-202105的S蛋白突变氨基酸进行功能预测，结果显示，在1 361处（G→C）被判定为“Deleterious”,可以推测此处的突变对病毒的侵袭力可能存在间接影响。研究结果可为我国PEDV变异株的流行情况及防控提供参考。
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四种常见猪肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用
《微生物学通报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【背景】猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、猪δ冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV）和猪轮状病毒（porcinerotavirus,PoRV）是当前导致猪群发生病毒性腹泻的4种主要病原，并且常发生混合感染。【目的】建立一种可鉴别诊断这4种腹泻病毒病的检测方法，对于临床诊断具有重要意义。【方法】针对PEDV的M蛋白基因、TGEV的N蛋白基因、PDCoV的N蛋白基因和PoRV的VP7蛋白基因分别设计特异性引物，进而构建相应的重组质粒标准品。通过对PCR反应条件优化，建立可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的多重RT-PCR检测方法。随后通过敏感性、特异性和重复性试验对该方法的有效性进行验证。【结果】敏感性试验结果显示，对PEDV-M、TGEV-N、PDCoV-N和PoRV-VP7重组质粒标准品的最低检测下限分别为1.75×10~2、1.5×10~3、1.6×10~2和1.6×10~2copies/μL；特异性试验结果显示，仅可检出本研究中的4种靶病毒，而猪群常见病毒CSFV、PRRSV、PCV2和PRV未能检出。重复性试验结果显示，选取10~8、10~6和10~4copies/μL3个不同浓度的重组质粒作为模板，其他条件不变，分别进行5次重复试验，5次试验均扩增出清晰、均匀的条带。对山东各地区送检的52份临床腹泻样品通过建立的四重RT-PCR方法进行检测，发现PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的阳性率分别为37%（19份）、6%（3份）、10%（5份）和25%（13份）。其中PEDV和PoRV混合感染2份（4%）,PEDV和TGEV混合感染2份（4%）,PEDV和PDCoV混合感染1份（2%）。通过单重RT-PCR对该多重RT-PCR临床样品检测结果进行重复验证，结果显示多重RT-PCR与常规单重RT-PCR结果符合率为100%。最后随机挑选5个检测为阳性的临床样本进行测序验证，结果均为相应病毒的基因片段。【结论】本研究建立了可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的四重RT-PCR检测方法，研究结果为临床4种猪腹泻病毒病的鉴别诊断及流行病学调查提供了技术手段。
关键词： 多重RT-PCR 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪δ冠状病毒 猪轮状病毒
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猪流行性腹泻病毒变异株的分离鉴定及其S基因序列分析
《内蒙古大学学报(自然科学版) 》 2017 北大核心
摘要：为分析山东省2016年上半年猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株变异情况,用Vero细胞从仔猪临床腹泻样品中进行病毒分离,通过细胞病变(CPE)观察、聚合酶链式反应(PCR)方法、免疫荧光(IFA)试验、电镜观察、动物回归试验和测序分析,分离鉴定1株PEDV毒株(SDMY1401株).将该毒株进行S基因序列分析和遗传进化分析,结果表明该毒株为PEDV流行变异株.该毒株S基因核苷酸序列与山东省分离株CH-SDZC-2015和河南省分离株CHHNAY-2015同源性最高为99.4%,与疫苗毒株CV777同源性为94%.遗传进化分析表明该毒株与经典毒株DR13、疫苗毒株CV777及以前国内分离毒株在不同分支.
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山东省猪腹泻病例中PEDV、TGEV和PRV的感染调查与分析
《中国畜牧兽医 》 2017 北大核心
摘要：为了解山东省规模化猪场由猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪伪狂犬病毒(PRV)引起猪病毒性腹泻的流行情况,自2014年1月至2016年12月,对来自山东省各地规模化猪场的猪腹泻病料(共3 035份)进行PCR检测。结果显示,PEDV、PRV和TGEV阳性率分别为67.49%、9.33%和3.29%;3年间,PEDV阳性率在2014年第四季度最低,为48.15%,2015年第四季度阳性率最高,为88.57%,2016年各季度阳性率相对2015年呈波动下降趋势;TGEV阳性率在2014年第四季度最高,为18.52%,2015年第三季度阳性率为15.38%,2016年第一季度阳性率为6.67%,其他季度未检测出阳性病料;PRV阳性率在2016年第二季度最高,为15.68%,除2014年第一季度未检出阳性病料外,2014年第二季度阳性率最低,为2.56%。通过对69份被动送检的病料进行PEDV、TGEV和PRV混合感染检测发现,这部分病料中PEDV、TGEV、PRV阳性率分别为86.96%、5.80%和37.68%;总单独感染率为69.57%,PEDV、TGEV和PRV单独感染率分别为57.97%、1.45%和10.14%;总混合感染率为30.43%,PEDV/PRV、PEDV/TGEV和TGEV/PRV混合感染率分别为26.09%、2.90%和1.45%;总单独感染率比总混合感染率高。结果表明,山东省存在PEDV、PRV和TGEV 3种病毒流行,存在PEDV/TGEV、TGEV/PRV和PEDV/PRV的混合感染,混合感染中主要为PEDV/PRV混合感染,不存在PEDV/PRV/TGEV的混合感染。目前PEDV是引起山东省猪病毒性腹泻的主要病因,本试验结果可为山东省猪病毒性腹泻的诊断和控制提供参考。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪伪狂犬病毒 调查与分析
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猪流行性腹泻病毒LAMP检测方法的建立及初步应用
《中国动物检疫 》 2016
摘要：猪流行性腹泻病毒是引起仔猪腹泻死亡的主要病原。为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的快速检测,利用PEDV S基因设计特异性引物,通过优化各种反应条件,建立了检测PEDV的环介导等温扩增快速检测方法(LAMP)。此方法特异性好,敏感度强,将反转录后的病毒c DNA稀释到108倍仍可检出,是PCR方法的100倍。本研究建立的LAMP方法操作简便、灵敏度高、特异性强,为临床PEDV的快速检测和预防奠定基础。
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