金黄色葡萄球菌Coa基因的克隆、表达及生物活性检测

张洪波; 杨宏军; 葛利江; 何洪彬; 杨少华; 王长法; 高运东; 仲跻峰; 《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2011 北大核心 CSCD

摘要：【目的】克隆金黄色葡萄球菌血浆凝固酶(Coa)基因,并在大肠杆菌中进行融合表达,分析重组蛋白的生物活性。【方法】用PCR法扩增金黄色葡萄球菌Coa基因,构建Coa基因原核表达载体pET32a(+)/coa,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平;将重组蛋白纯化后,测定其血浆凝固效价。【结果】扩增出了2 106 bp的Coa基因,其包含1个完整的开放阅读框,编码含701个氨基酸的成熟多肽;IPTG诱导后该基因表达的融合蛋白分子质量为100 ku,目的蛋白产量占菌体总蛋白的13%;纯化的重组蛋白含量为0.047 mg/mL,其对兔血浆凝固效价为0.012 mg/mL。【结论】成功地克隆、表达了金黄色葡萄球菌Coa基因,Coa凝固血浆效价为0.012 mg/mL。

关键词： 金黄色葡萄球菌 血浆凝固酶 克隆 表达 活性分析