文献类型： 中文期刊

作者： 张洪波 ¹ ; 杨宏军 ² ; 葛利江 ² ; 何洪彬 ² ; 杨少华 ² ; 王长法 ² ; 高运东 ² ; 仲跻峰 ² ;

作者机构： 1.山东省农业科学院奶牛研究中心

2.山东省农业科学院奶牛研究中心;山东农业大学动物医学院

关键词： 金黄色葡萄球菌;血浆凝固酶;克隆;表达;活性分析

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2011 年 39 卷 03 期

页码： 45-48+53

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆金黄色葡萄球菌血浆凝固酶(Coa)基因,并在大肠杆菌中进行融合表达,分析重组蛋白的生物活性。【方法】用PCR法扩增金黄色葡萄球菌Coa基因,构建Coa基因原核表达载体pET32a(+)/coa,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平;将重组蛋白纯化后,测定其血浆凝固效价。【结果】扩增出了2 106 bp的Coa基因,其包含1个完整的开放阅读框,编码含701个氨基酸的成熟多肽;IPTG诱导后该基因表达的融合蛋白分子质量为100 ku,目的蛋白产量占菌体总蛋白的13%;纯化的重组蛋白含量为0.047 mg/mL,其对兔血浆凝固效价为0.012 mg/mL。【结论】成功地克隆、表达了金黄色葡萄球菌Coa基因,Coa凝固血浆效价为0.012 mg/mL。