科研产出
中国樱桃花变叶病相关植原体的分子检测及鉴定
《园艺学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：从重庆市采集到表现花变叶症状的中国樱桃枝条样品,利用透射电镜在感病樱桃枝条韧皮部筛管细胞内观察到直径为200～500nm的圆形或者近圆形的植原体粒子。提取感病和健康花瓣的总DNA,利用植原体16S rRNA基因及延伸因子rp基因通用引物进行PCR扩增,从感病植株中扩增得到了长度分别为1.4kb的16SrRNA基因和1.2kb的rp基因。序列一致率分析表明,樱桃花变叶植原体16SrRNA基因和rp基因均与四川甜樱桃花变绿植原体相应基因的核苷酸一致率最高,分别为100%和99.8%;16SrRNA基因相似系数分析表明,樱桃花变叶植原体与四川甜樱桃花变绿植原体、枣疯植原体的相似系数均为1.00;基于16SrRNA基因和rp基因构建系统进化树时发现,樱桃花变叶植原体均与16SrV-B亚组成员聚为一簇,该植原体属于16SrV组的B亚组。
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氯化铯密度梯度离心法提纯枣疯病植原体DNA
《山东农业科学 》 2017
摘要：本研究利用CTAB法提取感染枣疯病的枣树叶片总DNA,再通过氯化铯-双苯酰亚胺密度梯度离心从总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA。利用枣树26S r DNA基因和枣疯病植原体16S r DNA基因的特异引物,分别对富集纯化前后感病枣树叶片总DNA进行PCR扩增。结果表明,模板浓度为1 ng/μL时,富集后的总DNA模板扩增枣树26S r DNA的电泳条带亮度低于富集前,扩增枣疯病植原体16S r DNA电泳条带亮度明显高于富集前。Real-time PCR检测结果表明,模板浓度为1 ng/μL时,纯化后的枣疯病植原体DNA中26S r DNA相对纯化前的量为0.0638,而JWB相对纯化前的量为0.5035,这说明采用氯化铯-双苯酰亚胺密度梯度离心法可以有效地从感染枣疯病枣树总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA。
关键词： 枣疯病 植原体 CTAB法 氯化铯-双苯酰亚胺密度梯度离心
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柿树带化病相关植原体的形态及分子鉴定
《植物生理学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：柿树为我国重要的经济林果树,柿果、柿叶和柿霜等包含丰富的生物活性成分,具有重要的医学价值。从山东省邹城市采集到表现带化并伴随节间缩短和叶片变小的柿树枝条样品,利用透射电子显微镜进行植原体细胞检测,结果显示染病的柿枝条韧皮部筛管细胞内存在直径为200~600 nm的圆形或者椭圆形植原体粒子。提取染病柿树枝条和健康枝条的韧皮部总DNA,利用植原体16S rRNA基因及延伸因子tuf基因通用引物进行PCR扩增,从染病组织DNA中得到了长度分别约为1.2和0.8 kb的片段,健康柿树枝条没有扩增条带。序列一致率分析表明,柿树带化植原体16S rRNA基因和tuf基因与枣疯植原体相应基因的核苷酸一致率分别高达99.8%和99.9%;i Phy Classifi er在线分析表明,柿树带化植原体与16Sr V-B亚组代表株系的16S rRNA基因具有相同的酶切图谱,相似系数为1.0;基于两个基因构建的系统进化树均表明,柿树带化植原体与16Sr V-B亚组成员聚为一簇。生物学和分子生物学鉴定结果表明,柿树带化病存在植原体,且该植原体属于榆树黄化组(16Sr V)B亚组,与候选种‘Candidatus Phytoplasma ziziphi’相关。
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甜樱桃丛枝病的形态及分子鉴定
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探明甜樱桃丛枝病是否存在植原体侵染。【方法】以3个甜樱桃园中表现丛枝病症状的植株和健康的植株叶片主脉为试材,通过提取总DNA,用植原体16S r RNA的特异引物进行巢式PCR扩增。【结果】丛枝病样品都扩增得到1.2 kb特异条带,健康样品未扩增到特异条带。将目的条带克隆测序后利用i Phy Classifier在线工具及系统进化树进行植原体亚组分类分析,发现甜樱桃丛枝病植原体属榆树黄化植原体组(16Sr V-B),与枣疯病、桃黄化、樱桃致死黄化属同一亚组。【结论】首次证实国内甜樱桃丛枝病是由16Sr V-B亚组植原体侵染引起。
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泰安枣疯病植原体的分子鉴定
《微生物学通报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】对3个枣疯病病原物泰安株系进行分子鉴定。【方法】采用植原体通用引物对R16F2n/R16R2,通过直接PCR技术,扩增枣疯病植原体16S rDNA基因,通过16S rDNA基因序列分析和在线模拟16S rDNA-RFLP分析,并将其16S rDNA基因序列提交到GenBank数据库。【结果】3个枣疯病病原物16S rDNA基因片段与16SrⅤ-B亚组中枣疯病植原体(AB052876和AF279272)、樱桃致死黄化植原体(AY197659)及杏卷叶植原体(FJ572660)的同源性高达99.5%99.7%,分别命名为枣疯病植原体泰安圆铃1号株系(Jujube witches’-broom phytoplasma strain Yuanling1,JWB-Yuanling1,TA)、枣疯病植原体泰安鲁北冬枣株系(Jujube witches’-broom phytoplasma strain Lubeidongzao,JWB-Lubeidongzao,TA)和枣疯病植原体泰安大白铃株系(Jujube witches’-broom phyto-plasma strain Dabailing,JWB-Dabailing,TA),基因登录号分别为:HM989946、HM989947和HM989948。【结论】3个枣疯病植原体泰安株系均归属于16SrⅤ-B亚组。
关键词： 枣疯病 植原体 16S rDNA序列分析 模拟16S rDNA-RFLP分析 分子鉴定
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