科研产出
桦褐孔菌口服佐剂对禽类疫苗的体液免疫增强作用研究
《安徽农业科学 》 2024
摘要：为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation product, IOFP)作为禽类疫苗佐剂的适用性，选择商品化禽流感灭活疫苗和鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗分别免疫SPF鸡和SPF鸭，并饲喂含0.8%IOFP的饲粮，同时设置饲喂商品化饲粮的对照组。在免疫后不同时间点采集鸡和鸭的外周血，分离血清后分别测定禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)特异性血凝抑制(hemagglutinin inhibition, HI)抗体、鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus, DTMUV)特异性抗体及二者中和抗体效价。使用统计学方法评价IOFP对机体体液免疫反应的影响。鸭免疫后28 d使用DTMUV强毒株攻毒，持续检测泄殖腔排毒量，以确定IOFP对DTMUV排毒量的影响。结果显示，IOFP作为口服佐剂能够显著提升AIV、DTMUV疫苗抗体和中和抗体水平，特别是对免疫早期抗体的改善效果尤为显著。此外，添加IOFP还能够减少DTMUV的排毒量，缩短排毒时间。由此可见，IOFP是一种禽类病毒性疫苗普遍适用的口服佐剂，对于缩短免疫“空窗期”、提升疫苗保护效果具有较好的改善作用。
关键词： 桦褐孔菌发酵产物 禽流感病毒灭活疫苗 鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗 抗体 中和抗体
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不同公司ELISA试剂盒与HI法检测鸡新城疫抗体的比较
《家禽科学 》 2019
摘要：分别采用A、B、C三个公司的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒和血凝抑制(HI)试验方法对168份临床免疫鸡血清和标准阴阳性血清进行新城疫抗体监测方法的比对试验与研究,比较间接ELISA和血凝抑制(HI)两种试验方法的相关性.研究结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化间接ELISA抗体检测试剂盒的检测结果与血凝抑制(HI)试验的阳性符合率分别为98%、96.7%、90.2%;阴性符合率分别为86.7%、80%、86.7%;阴阳性总体符合率分别为97%、95.2%、89.9%;A、B、C三个公司的ELISA抗体检测试剂盒的检测时间分别为2.5、3、3h.产品价格分别为1100、800、700元.比较发现,间接ELISA方法是一种快速、敏感、特异的血清学诊断方法,不同公司生产的商品化ELISA抗体检测试剂盒在敏感性、特异性和检测时间上均存在较大的差异,综合分析,B公司生产的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒成本较低,敏感性较高,可以用于临床样本的大规模检测.
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11种牛分枝杆菌抗原在牛结核病诊断中的初步评价
《中国畜牧兽医 》 2018 北大核心
摘要：为筛选及评价用于牛结核病诊断的抗原,本试验将CFP-10、ESAT-6、TB10.4、TB27.4、MPT51、MPT63、MPT64、MPB70、MPB83、Rv3872和Ag85B共11种牛分枝杆菌抗原分别作为包被抗原建立间接ELISA方法,比较其对牛结核病的检出率;同时利用豚鼠和牛的皮试试验评价重组蛋白作为皮试试验刺激原的潜力。此外,将重组蛋白分别刺激结核病阳性牛和阴性牛的抗凝血24h,检测血浆中的IFN-γ水平,评价各重组蛋白作为IFN-γ释放试验刺激原的潜力。结果显示,不同重组蛋白对结核病阳性血清的反应活性不一,MPB70总检出率最高,为59.7%;其次是Ag85B、ESAT-6和MPB83,检出率均在45%以上;MPT51的检出率最低,仅为2.2%。豚鼠和牛皮试试验均显示,单个重组蛋白作为刺激原难以产生令人满意的迟发型过敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH),而TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63或Rv3872作为补充抗原,分别与CFP-10或ESAT-6混合,均可特异性地刺激结核病阳性牛产生较强的DTH反应,且与PPD-B无显著差异(P>0.05)。重组蛋白CFP-10、ESAT-6、TB10.4和MPT51均能刺激结核病牛全血释放一定的IFN-γ,其中CFP-10、CFP-10-ESAT-6串联蛋白和MPT51刺激结核病阳性牛全血释放的IFN-γ显著高于阴性牛(P<0.05)。因此,这11种牛分枝杆菌抗原并不适合单独用于牛结核病的血清学诊断、皮试试验或IFN-γ释放试验,但以CFP-10和ESAT-6为核心,TB10.4、TB27.4、MPT64、MPT63、Rv3872或MPT51作为其补充抗原,均能提高检测敏感性,有作为皮试试验和IFN-γ释放试验特异性刺激原用于牛结核病诊断的潜力。
关键词： 牛分枝杆菌 牛结核病 诊断 抗体 皮试试验 IFN-γ释放试验
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鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的表达及ELISA诊断试剂盒的研制与应用
《浙江农业科学 》 2018
摘要：为了建立一种鸡传染性支气管炎抗体检测的ELISA方法,本研究根据GenB ank中的传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株LC2的N基因序列,设计一对引物,扩增N基因,将目的基因与载体pE T-32a(+)连接,构建重组表达质粒pE T-32a-N,转化E.coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pE T-32a-N,纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原建立鸡传染性支气管炎抗体检测的间接ELISA方法,并利用所建立的ELISA方法对临床血清样本进行检测。结果表明,IBV N基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western-blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸡传染性支气管炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为2μg·孔~(-1),血清最佳稀释度为1:200,临界值为D450值≥0.297,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与进口IDEXX试剂盒的符合率为96.25%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸡传染性支气管炎母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。综上所述,本研究所建立的N-ELISA方法是一种有效的鸡传染性支气管炎病血清学诊断的方法,并为进一步研究IBV N蛋白的免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 N基因 表达 ELISA 抗体 检测
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H_7Re-1疫苗筛选及免疫效果评估
《家禽科学 》 2018
摘要：为筛选免疫效果好的H_7Re-1疫苗,本试验选择四个厂家的H_7Re-1疫苗,分别对SPF鸡进行两次免疫。免疫后通过抗体检测结果筛选出H_7抗体最好的疫苗在肉种鸡场应用。对免疫H_7Re-1疫苗的三个肉种鸡场定期采血,跟踪检测H_7抗体,评估免疫效果。结果表明:A公司的H_7Re-1疫苗在SPF鸡上的免疫抗体最高达11.13log2。三个种鸡场免疫A公司H_7Re-1疫苗后,H_7抗体均显著上升,抗体峰值均在9log2左右,免疫效果较好。
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水稻光敏色素B抗体的制备及特异性检测
《山东农业科学 》 2017
摘要：光敏色素是植物重要的光受体之一,主要感受红光和远红光。水稻光敏色素基因家族包括3个成员,即PHYA、PHYB和PHYC。我们已有研究表明PHYB在水稻生长发育和胁迫反应中具有重要作用。然而目前缺乏有效的水稻PHYB蛋白质抗体,极大地制约着PHYB基因作用机制的解析。在本研究中,我们比较了水稻光敏色素家族3个成员氨基酸序列同源性,选取了PHYB蛋白质C端的特异多肽。在此基础上,分离了特异多肽对应的c DNA序列,将其克隆在原核表达载体p ET16b上,利用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔(IPTG)诱导、纯化获得了PHYB蛋白质特异性抗原,通过免疫新西兰大白兔,制备了PHYB蛋白的多克隆抗体。免疫印迹检测表明该抗体具有很高的特异性。本研究为深入解析PHYB基因在水稻生长发育中的作用机制提供了必要保障。
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“虫草欣康”对蛋鸡生产性能和鸡蛋品质的影响
《中国家禽 》 2016 北大核心
摘要：为了探讨"虫草欣康"对产蛋鸡产蛋性能及鸡蛋品质等方面的影响,采用在蛋鸡料中添加0.2%"虫草欣康"进行试验,记录生产性能指标,统计产蛋率、破蛋率、平均蛋重、料蛋比、死淘率、蛋品质和抗体等指标,测定了胆固醇和维生素A、D、E含量。结果显示:试验组产蛋率为90.80%,比对照组(90.66%)高0.14%,差异不显著(P>0.05);料蛋比为1.979,低于对照组的1.985,差异不显著(P>0.05);破蛋率试验组为0.3684%,低于对照组的0.3878%,差异显著(P<0.05);至30 d时,试验组和对照组鸡蛋的维生素A、D、E含量分别为210μg/100 g、53 IU/100 g、1.88 mg/100 g和199μg/100 g、30.3 IU/100 g、1.33 mg/100 g,试验组均高于对照组,胆固醇含量(试验组312 mg/100 g、对照组530 mg/100 g)显著降低;试验组和对照组NDV、H9N2 AIV抗体效价分别为10.2 log2、10 log2和9.7 log2、9.4 log2。试验表明:"虫草欣康"可降低破蛋率,对提高蛋鸡生产性能有一定作用,同时能改善鸡蛋营养成分,并提高机体的部分免疫功能。
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复方多肽核酸溶液对雏鸡免疫增强作用的研究
《山东农业科学 》 2014
摘要：对7日龄健康雏鸡免疫前24 h按照分组分别使用复方多肽核酸溶液和生理盐水,然后以新城疫克隆30弱毒苗点眼滴鼻,在免疫后7、14天心脏采血,采用HI法检测新城疫抗体水平。结果表明:应用复方多肽核酸溶液及新城疫克隆30弱毒苗后各试验组7天抗体水平明显升高,14日龄、21日龄抗体水平经t检验,试验组与对照组组间差异显著(P<0.05),试验组间差异不显著(P>0.05)。14日龄时各试验组外周血T细胞值与对照组差异显著(t>1.96,P<0.05)。21日龄时各试验组外周血T细胞值与对照组差异极显著(t>2.57,P<0.01)。研究结果显示复方多肽核酸溶液是一种很有前途的生物免疫增强剂。
关键词： 复方多肽核酸溶液 体液免疫 细胞免疫 α-醋酸萘酯酶法 抗体 T细胞比例
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外源性新城疫和禽流感抗体在SPF鸡体内的动态消长规律
《家禽科学 》 2013
摘要：选取2月龄SPF鸡100只,随机分组,分别设接种(肌注和口服)、攻毒保护和对照(正常和发病)组。检测SPF鸡接种不同接种途径、时间等血清中新城疫(Newcastle disease virus,NDV)和禽流感(Avian influenza virus,AIV)不同亚型(H5、H9N2)抗体滴度的变化,进而探讨不同抗体在体内的消长规律。结果表明:肌肉注射组的ND、H5(RE-4和RE-6)和H9N2抗体在注射后14d内,每天的抗体水平均显著高于对照组(P<0.01),且注射后抗体滴度在24h内达到峰值,高水平抗体至少可维持5d。口服抗体效果较差。动物攻毒试验表明,抗体对NDV具有较好的保护效果。
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2,4-D人工抗原合成及2,4-D类农药特异性多克隆抗体的研制
《农业环境科学学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：通过改良EDC法,将2,4-DB、2,4-D分别与载体蛋白(BSA、OVA)偶联合成了2,4-D的免疫原2,4-DB-BSA、2,4-D-BSA和包被原2,4-DB-OVA、2,4-D-OVA。免疫抗原测定结果表明,所得紫外吸收光谱,具有载体蛋白BSA和半抗原2,4-DB或2,4-D的特性,最大吸收峰为282nm。合成2,4-DB-BSA、2,4-D-BSA免疫抗原的结合比分别为1∶24、1∶20,合成的2,4-DB-OVA、2,4-D-OVA包被原的结合比分别为1∶10、1∶8。上述两种免疫原分别免疫新西兰白雄兔,获得2,4-D类农药多克隆抗体。其中免疫2,4-DB-BSA的两只兔PBD1和PBD2的效价较高,分别是1∶102400和1∶51200。选择效价较高的PBD1多克隆抗体进一步优化筛选出抗原抗体的工作浓度,2,4-D-OVA包被原3μg·mL-1,PBD1多克隆抗体1∶12800。经测定,该多克隆抗体对目标检测物2,4-D、2,4-Dbutylester敏感度较高,抑制中浓度(I50)、检测限(I20)分别为,2,4-D:179.8ng·mL-1,1.09ng·mL-1;2,4-Dbutylester:3010.0ng·mL-1,1.53ng·mL-1。对2,4-D识别的特异性也较强。另外测定了制备2,4-D多克隆抗体对几种2,4-D类似结构化合物交叉特异性反应,2,4-DB最强,2,4-D次之,之后依次为2,4-D丁酯、2,4-D异丙酯,交叉反应性较差的有2甲4氯、2,4,5-涕、2,4-滴丙酸。
关键词： 2,4-D 半抗原 免疫抗原 酶联免疫吸附测定(ELISA) 抗体
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