科研产出
猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌多重实时荧光PCR方法的建立
《微生物学通报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【背景】猪链球菌（Streptococcus suis,SS）和猪多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌，常出现混合感染，临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病，建立一种能同时检测2种病原的多重实时荧光定量PCR检测方法。【方法】基于猪链球菌的gdh基因和猪多杀性巴氏杆菌的plpE基因，设计2对特异引物及TaqMan探针，以细菌16S rRNA基因设计通用引物及探针，通过对反应条件优化，建立了一种能同时检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌的多重实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能够特异性地检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌，与细菌分离后的测序结果验证完全一致。此方法对重组质粒标准品的最低检出浓度分别为4.53×102copies/μL和3.97×102 copies/μL。重复性试验结果显示，该方法的组内和组间变异系数均小于3%。【结论】本实验所建立的方法准确、简便、可靠，能够用于2种病原菌的同时检测，为猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病的防治提供了有效的检测工具，具有重要的流行病学意义和临床应用价值。
关键词： 猪链球菌（SS） 猪多杀性巴氏杆菌（Pm） 多重实时荧光定量PCR
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基于16S rRNA基因的食源性致病菌实时荧光定量PCR检测研究
《山东农业科学 》 2017
摘要：本研究以16S rRNA基因作为靶基因,利用TaqMan探针技术建立了针对志贺氏菌(Shigella)、沙门氏菌(Salmonella)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)三种主要食源性致病菌的多重实时荧光定量PCR检测技术。结果表明,建立的荧光定量PCR检测体系特异性良好、灵敏度高、简便快捷,大大缩短了检测时间,在食源性致病菌快速筛查方面具有良好的应用前景。
关键词： 食源性致病菌 16S rRNA基因 多重实时荧光定量PCR TaqMan探针
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一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立
《山东农业科学 》 2016
摘要：羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以及相应的Taq Man-MGB探针,建立羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测方法,并引入内标质控有效保证检测体系的准确性。本检测体系对羊奶、牛奶及豆浆的基因组DNA检测敏感度为0.01 ng;对羊奶中掺入牛奶和豆浆的体积掺假检测灵敏度均为0.1%。因此,本研究建立的羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测体系具有通量大、灵敏度高、特异性好等优点,实现了对羊奶中其他源性成分快速、准确的检测,对保障相关产品市场安全具有重要意义。
关键词： 羊奶 牛奶 豆浆 多重实时荧光定量PCR
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