科研产出
超表达Cdc20基因不影响牛卵母细胞第一极体排出
《中国生物化学与分子生物学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：CDC20(cell division cycle 20)是后期促进复合物(anaphase-promoting complex,APC)的共激活剂之一,也是纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint,SAC)的靶点,在细胞周期调控中扮演重要角色.为探讨Cdc20在第一极体排出(first polar body extrusion,PBE I)中的作用,Cdc20基因被成功克隆并构建了真核表达载体pCdc20-Venus,随后用T7 Mmessage Mmachine Kit(Ambion)以线性化pCdc20-Venus为模板体外转录(in vitro transcription)获得带帽的Cdc20-Venus mRNA,将Ccdc20-Venus mRNA显微注射到体外培养的牛卵母细胞胞质中进行超量表达.结果表明,真核表达载体pCdc20-Venus转染HeLa细胞后能够正常表达,绿色荧光在细胞核周围呈弥散状分布;将Cdc20-Venus mRNA注射到牛卵母细胞胞质后,胞质内有绿色荧光出现.Cdc20-Venus mRNA注射组卵母细胞的PBE I率(48.9%)与Venus mRNA注射组卵母细胞的PBE I率(50.9%)和未注射组卵母细胞的PBE I率相比均没有显著差异(P>0.05).通过Cdc20在牛卵母细胞内的超量表达,结果显示,超量表达Cdc20基因对牛卵母细胞PBE I没有显著影响(P>0.05).
关键词： 牛 Cdc20 卵母细胞 超表达 减数分裂 第一极体排出率
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山羊转基因克隆胚在体内和体外发育的研究
《江西农业学报 》 2010
摘要：探讨了体内/外成熟卵母细胞、体内/外培养系统、输卵管液和输卵管上皮细胞共培养系统对转基因克隆胚发育的影响。结果表明:体内/外成熟卵母细胞对转基因克隆胚各阶段发育率无显著影响。体内/外培养系统中,转基因克隆胚2～3-细胞、4-细胞、8-细胞发育率差异不显著;16-细胞和桑/囊胚发育率差异显著。对照组和20%输卵管液中,转基因克隆胚2～3-细胞、4-细胞、8-细胞发育率均显著高于50%输卵管液;在20%输卵管液中16-细胞的发育率显著高于对照组和50%输卵管液。转基因克隆胚在输卵管上皮细胞共培养系统和SOF培养系统中培养,2～3-细胞和4-细胞发育率无显著差异;8-细胞、16-细胞和桑/囊胚的发育率差异显著。
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哺乳动物卵母细胞老化的研究进展
《动物学杂志 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：卵母细胞的老化能够导致妊娠率降低、流产率增加和出生缺陷。研究排卵后卵母细胞在老化过程中发生的变化及卵母细胞老化的机制,探讨延缓卵母细胞老化的有效措施,对于改进卵母细胞体外成熟和受精系统,完善辅助生殖技术并减少出生缺陷具有重要的理论和现实意义。本文将从卵母细胞老化研究所用的方法,老化过程中纺锤体相关蛋白、线粒体、泛素、组蛋白修饰和DNA甲基化修饰的变化,卵母细胞老化与皮质反应、多精受精及凋亡的关系,老化的影响因素和分子机制等几个方面对哺乳动物卵母细胞老化的研究进展做一综述。
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体外培养时间和培养系统对山羊卵母细胞孤雌激活及发育的影响
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：探讨了体外培养时间和培养系统对山羊卵母细胞孤雌激活和体外发育的影响。结果表明:卵母细胞体外培养36、33、30和27 h活化率极显著高于18、21、24 h(P<0.01),体外培养24和21 h活化率显著高于18h(P<0.05)。2-4-细胞卵裂率,27、30和33 h极显著高于18 h(P<0.01),显著高于21 h(P<0.05)。大于4-细胞发育率24、27和30 h极显著高于21、33和36 h(P<0.01)。大于8-cell的发育率,24、27和30 h极显著高于21h(P<0.01)。24和27 h大于16-细胞的发育率极显著高于30h(P<0.01)。孤雌胚在TCM199和SOF中大于4-细胞发育率显著(P<0.05)低于颗粒细胞共培养系统,极显著低于(P<0.01)输卵管上皮细胞共培养系统。孤雌胚在颗粒细胞共培养系统中大于8-细胞和大于16-细胞发育率显著低于(P<0.05)输卵管上皮细胞共培养系统。
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有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2)在哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟中的作用
《生殖与避孕 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient2,MAD2)为一种纺锤体检验点蛋白,是监控卵子减数分裂纺锤体行为和染色体分离的最重要的关卡蛋白之一。人MAD2编码一段比较保守的Mr=24000蛋白片段,它的单倍体和寡聚体状态、非磷酸和磷酸化状态与它的活性密切相关。MAD2的定位在不同的种属、不同的生殖细胞、不同的细胞分裂状态间都有差异。在卵母细胞中,MAD2细胞定位(胞质定位和动粒定位)随减数分裂细胞周期的进程和/或微管与动粒之间的联系改变而发生相应的变化。在哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟过程中,MAD2的主要作用是控制后期的起始和染色体的分离;另外,它与卵母细胞的凋亡有关,并可能参与卵母细胞减数分裂的恢复。目前已有的2种关于纺锤体检验点的作用机制模式,但都存在缺陷。
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牛卵母细胞玻璃化冷冻保存影响因素的研究
《生物学杂志 》 2008 CSCD
摘要：采用毛细玻璃管法对牛卵母细胞进行玻璃化冷冻保存,解冻后再进行体外受精(IVF)和早期胚胎的体外培养(IVC)。在此技术的基础上,分别对冷冻前平衡时间、解冻处理、卵丘细胞层数以及卵母细胞所处的减数分裂阶段等影响卵母细胞冷冻保存的因素进行研究,以期筛选出适合牛卵母细胞冷冻保存的方法。结果发现,处于MⅡ期卵母细胞在10%二甲基亚砜(DMSO)+10%乙二醇(EG)液(VS1)中平衡1~3min,然后进行玻璃化冷冻保存。解冻时将卵母细胞先移入VS1液中处理15s,然后移入蔗糖稀释液中。另外发现,冷冻保存时部分卵丘细胞对卵母细胞有保护作用。而减数分裂阶段不影响解冻后卵母细胞形态正常率,但对胚胎发育率有严重影响。
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山羊卵母细胞孤雌激活和孤雌胚体外发育的研究
《吉林农业大学学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：用离子霉素、乙醇、电刺激和Ca-A23187对体外成熟山羊卵泡卵母细胞的孤雌激活和孤雌胚体外发育进行了较为系统的研究。结果表明:2.5,5.0,10.0μmol/L离子霉素对卵母细胞激活率分别为54.0%,58.2%,57.9%,孤雌胚发育率分别为1.5%,3.4%,0%,激活率和发育率均无显著差异(P>0.05)。5.0,10.0,15.0,20.0μmol/L Ca-A23187对卵母细胞激活率分别为31.0%,46.4%,41.8%,45.8%,其中5.0μmol/L Ca-A23187激活率显著低于其他处理组(P<0.05)。5.0μmol/L处理大于4-细胞发育率,极显著低于10.0μmol/L和20.0μmol/L处理(P<0.01),显著低于15.0μmol/L处理(P<0.05)。3%,7%,11%和15%乙醇对卵母细胞激活率分别为40.0%、61.4%、63.0%和67.9%,其中3%乙醇活化率极显著低于其他各组(P<0.01)。15%乙醇致卵母细胞死亡率为15.4%,显著高于其他各组(P<0.05)。7%和11%乙醇处理2~4-细胞和大于4-细胞的发育率,均显著高于3%和15%乙醇处理(P<0.05)。15%乙醇处理大于8-细胞的发育率,极显著低于7%乙醇(P<0.01),显著低于11%乙醇(P<0.05)。在含Ca2+电激液中,用1.00,1.25,1.50,1.80 kV/cm电压刺激卵母细胞,活化率分别为48.4%,54.3%,55.8%,45.1%,2~4细胞卵裂率分别为52.3%,57.9%,54.7%,53.1%,差异均不显著(P<0.05)。
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哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展
《家畜生态学报 》 2007
摘要：综述了近年来关于哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展,并对这项技术的发展前景进行展望。重点讨论了影响哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的几种因素,包括冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻方法和卵母细胞所处的发育阶段等,以及冷冻过程中细胞膜、微丝、微管、皮质颗粒、纺锤体和线粒体等出现的损伤。目前,玻璃化冷冻法存在的最主要问题是冷冻过程中造成超微结构不可逆转的损伤影响胚胎发育,亟待解决。
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玻璃化冷冻保存牛卵母细胞技术研究
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：采用一步法和二步法研究玻璃化冷冻保存的牛生发泡 (GV )期和体外成熟 (IVM)卵母细胞的发育潜力。结果表明 ,冷冻基础液 PBS和 TCM199在玻璃化冷冻中的效果差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;冷冻程序和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有明显影响 ,二步法冷冻效果显著优于一步法 (P<0 .0 5 ) ,IVM卵母细胞冷冻效果显著优于GV期 (P<0 .0 5 )。
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