PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株qPCR区分方法的建立与应用

刘月月; 陶海英; 杜以军; 王兴东; 于江; 赵鹏伟; 刘思当; 王金宝; 吴家强; 《家畜生态学报 》 2013

摘要：为快速准确区分PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株以及对流行毒株进行定量检测,按GenBank中发表的美洲型PRRSV SX-1分离株、弱毒疫苗株NSP2基因缺失部位的不同设计了一对特异性引物,通过RT-PCR和体外转录的方法,构建了体外转录RNA作为标准品,并对反应条件和反应体系进行优化,旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性和稳定性良好的qPCR鉴别方法。结果表明,该方法最低能检测出1.0×101拷贝/μL的模板,敏感性比常规PCR高100倍;应用该方法对218份临床样本进行鉴别与定量,qPCR检出率较常规RT-PCR高12.9个百分点。研究表明,qPCR鉴别方法的建立实现了对PRRS流行毒株与疫苗毒株的快速区分以及对流行毒株的定量检测,为PRRS的快速诊断提供了依据。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征 qPCR 体外转录 Nsp2基因