科研产出
鸡β-防御素-1基因在大肠杆菌中的融合表达及其初步纯化与抗菌活性测定
《家禽科学 》 2013
摘要：防御素是广泛存在于动、植物体内的一大类阳离子抗菌肽,它们在宿主—家禽天然免疫中发挥着重要作用,是机体抵御外界病原微生物入侵的一道重要防线,在鸡体内只存在Gallinacins类β-防御素。鸡β-防御素-1(Gal-1)对多种致病菌都具有杀菌作用,具有很好的药用开发前景。通过PCR技术从重组质粒pMD-Gal1中克隆出Gal-1基因成熟肽编码区,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET30a-Gal1,将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。筛选阳性克隆菌株,用浓度为1.0mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,Gal-1基因在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物表观分子量约为12kDa。对融合蛋白表达条件进行优化,提高可溶组分所占比例。表达上清用Ni2+-NTA Sepharose 4B进行亲和层析纯化,在洗脱液中显示单一条带。琼脂糖孔穴扩散法检测显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有明显的抑制活性。Gal-1融合蛋白成功表达为进一步研究鸡β-防御素的功能奠定基础。
关键词： 抗菌肽 β-防御素-1(Gal-1) 融合表达 分离纯化 亲和层析 抑菌活性
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融合蛋白C3d提高新城疫灭活苗的免疫原性
《西南农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：补体C3d是补体系统(complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。本试验利用RT-PCR技术从AA肉鸡肝脏总RNA中扩增C3d cDNA,测序证实为C3d基因。然后将其连接至表达载体pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3),1%IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blotting证实目的蛋白为C3d。亲和层析分离C3d融合蛋白,与纯化新城疫病毒(Lasota株)经戊二醛连接后免疫SPF鸡。血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体水平,MTT法检测胸腺T淋巴细胞转化率。结果表明C3d融合蛋白能够提高特异性抗体水平以及细胞免疫水平,本研究为进一步研究、利用鸡补体C3d奠定了基础。
关键词： C3d RT-PCR 亲和层析 MTT 血凝抑制试验
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黄曲霉毒素B_1抗独特型抗体的制备和应用研究I 抗独特型抗体的制备和性质研究
《菌物学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：以黄曲霉毒素B1(AFB1)与牛血清蛋白(BSA)的连接物AFB1-BSA注射免疫兔子获得抗AFB1抗血清,经(NH4)2SO4沉淀、酶切处理与亲和层析分离纯化后,得到抗AFB1独特型抗体Ab1及其酶切片段Fab1,然后再将Fab1注射免疫BALB/c小鼠,得到抗(抗AFB1)独特型抗体Ab2及其酶切Fab2。研究了Ab2和Fab2的性质,结果表明,Ab2和其Fab2都仅与Ab1及其Fab1反应,而不和抗桔霉素等其他抗体反应,有较好的特异性。以AFB1与卵清蛋白(OV)的连接物AFB1-OV为包被抗原,Fab1为反应抗体,Ab2和Fab2为竞争抗原,达到50%的竞争抑制率时,Ab2和Fab2的浓度分别为3.98ug/ml和1.12ug/ml;而以Ab2和Fab2为包被抗原,Fab1为反应抗体,AFB1为竞争抗原,达到50%的竞争抑制率时,AFB1的浓度分别为44.67ug/L和6.31ug/L,这表明无论是Ab2还是Fab2都和AFB1有很好的内影像关系,可以作为AFB1的替代品用于AFB1的免疫学检测。但是相对而言,由于Fab2的分子量小,反应时的空间位阻小,所以Fab2更适合于用作AFB1的替代品。
关键词： 黄曲霉毒素B_1-牛血清蛋白(AFB1-BSA)连接物 抗原 亲和层析
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