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一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法

专利类型： 中国发明申请

专利权人： 山东省农业科学院畜牧兽医研究所

发明人： 谭秀文;游伟;靳青;刘桂芬;刘晓牧;宋恩亮;万发春

专利号： CN201310465591.5

摘要： 本发明公开了一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法。它先将组织匀浆处理成乳糜状，然后加入冷冻液混匀，分装到含有蔗糖、DMSO和谷胱甘肽的冷冻管中，之后放置在冷冻保存盒中-80℃超低温冰箱过夜，最后放入液氮中长期保存。解冻时依次经过解冻液、培养液离心洗涤，之后组织块可直接接种培养或经蛋白酶消化成单个细胞后培养。本发明先将组织用匀浆机处理成乳糜状，有利于冷冻保护剂渗透进入组织细胞内，使细胞内水分脱出；同时冷冻液中添加的非渗透性保护剂蔗糖，也有利于组织细胞内的水分脱出；加入抗氧化物质谷胱甘肽，有助于减轻氧自由基对细胞内蛋白的破坏作用。解冻后组织块在培养瓶内直接接种，贴壁存活率在96%以上。

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