文献类型： 中文期刊
作者： 张烨 1 ; 赵术珍 1 ; 王江山 1 ; 夏晗 1 ; 侯蕾 1 ; 任丽 2 ; 王兴军 1 ;
作者机构： 1.山东省农业科学院生物技术研究中心
2.开封农林科学研究院
关键词： 花生;光敏色素;基因克隆;原核表达
期刊名称： 四川农业大学学报
ISSN： 1000-2650
年卷期： 2015 年 01 期
页码： 13-21
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】克隆了花生(Arachis hypogaea L.)的2个光敏色素基因,并对其进行生物信息学分析,构建这2个基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达蛋白,为进一步纯化蛋白制备抗体以及研究这2个基因在花生发育中的作用奠定基础。【方法】首先,根据花生转录组中编码光敏色素A基因与光敏色素B基因的部分序列,以花生叶片中提取的总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE技术对这2个基因的全长ORF序列进行克隆;然后,使用MEGA软件分析花生光敏色素与其他物种中光敏色素的亲缘关系;构建AhphyA、AhphyB的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21并诱导蛋白表达。【结果】2个基因全长ORF分别为3378bp和3 456bp,分别编码1 125和1 151个氨基酸的蛋白;其氨基酸序列与大豆的光敏色素A蛋白和光敏色素B蛋白的相似性分别为88%和90%;经SDS-PAGE检测,在大肠杆菌中2个基因均能受IPTG诱导表达产生蛋白。【结论】利用RT-PCR与RACE技术从花生中克隆得到了2个光敏色素基因,成功构建了原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到了高效表达。
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