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洋葱Ms位点多重PCR标记的开发与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 王振宝 1 ; 霍雨猛 1 ; 刘冰江 1 ; 缪军 1 ; 杨妍妍 1 ; 高莉敏 1 ; 孔素萍 1 ; 程斐 2 ; 陈宁 2 ; 吴雄 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院蔬菜花卉研究所/山东省设施蔬菜生物学重点实验室/国家蔬菜改良中心山东分中心

2.青岛农业大学园艺学院

关键词： 洋葱;雄性不育;Ms位点;多重PCR标记

期刊名称： 山东农业科学

ISSN： 1001-4942

年卷期： 2014 年 09 期

页码： 13-17

摘要： 以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6μL、DNA模板1μL(约50 ng)、10μmol/L引物各1μL、5 U/μL rTaq聚合酶0.6μL、用灭菌双蒸水补齐至25μL;反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,65.4℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。优化后的体系和程序可以检测到清晰的目的条带,通过一次PCR反应即可鉴定Ms位点的3种基因型(MsMs、Msms、msms),操作简单,稳定性好。

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