文献类型： 中文期刊
作者： 陈立伟 1 ; 宗晓娟 2 ; 王文文 1 ; 王甲威 2 ; 魏海蓉 2 ; 徐丽 2 ; 严雪瑞 1 ; 刘庆忠 2 ;
作者机构： 1.沈阳农业大学植物保护学院
2.山东省果树研究所
关键词： 李矮缩病毒;外壳蛋白;基因克隆;原核表达
期刊名称： 中国农学通报
ISSN： 1000-6850
年卷期： 2012 年 28 卷 12 期
页码： 177-181
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为制备李矮缩病毒(prunus dwarf virus,PDV)抗血清,克隆PDV外壳蛋白(CP)基因,构建原核表达载体,优化蛋白表达条件。以阳性感病甜樱桃叶片为试验材料,提取总RNA,根据PDV CP基因(L28145.1)设计特异引物,RT-PCR方法扩增,克隆、测序,构建原核表达载体pET30a-PDVCP,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达。PDV CP基因(GenBank登录号:JF333587.1)全长657 bp,编码217个氨基酸,与GenBank其他PDV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.2%~93.9%,推导的氨基酸序列同源性为97%~99%。根据完整CP基因核苷酸序列构建系统进化树显示:12个PDV分离物可分为3组,泰安分离物与巴西、土耳其等分离物属于Ⅰ组。成功构建原核表达载体pET30a-PDVCP,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。转pET30a-PDVCP载体的大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达分子量约24 kDa的重组蛋白。该重组蛋白在30℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导4 h表达量最大。
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