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小麦TaSIM蛋白的原核表达与纯化及Western blotting检测

文献类型： 中文期刊

作者： 于月华 1 ; 郑崇珂 2 ; 倪志勇 1 ;

作者机构： 1.新疆农业大学农学院

2.山东省农业科学院山东省水稻研究所

关键词： 小麦（Triticum aestivum）;TaSIM;蛋白纯化;Western杂交

期刊名称： 分子植物育种

ISSN：

年卷期： 2021 年 002 期

页码： 494-497

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了获得TaSIM （Salinity-induced R2R3-MYB）基因的纯化蛋白,以便研究TaSIM转录因子的DNA结合特异性。本研究以含有pET28a-TaSIM原核表达载体的大肠杆菌BL21为材料,用0.5 mmol/L IPTG,在37℃诱导TaSIM融合蛋白表达2 h,收集上清液,采用Ni-NTA柱纯化含有His标签的TaSIM融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测结果表明获得了分子量大小约为33 kD的TaSIM融合蛋白。采用Western blotting检测TaSIM融合蛋白的表达,以鼠抗血清和辣根过氧化酶标记的山羊抗小鼠Ig G为抗体,结果表明TaSIM融合蛋白能够和抗体特异结合,说明诱导的蛋白是TaSIM融合蛋白。研究结果为进一步利用凝胶阻滞方法检验TaSIM蛋白与顺式作用元件的结合提供实验基础。

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[2]口蹄疫病毒3B蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备. 辛旭,吴香菊,齐静,王永志,李相安,杜正国,单虎,杜以军. 2021

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