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薹菜CYP79B_5基因的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 宋廷宇 1 ; 侯喜林 2 ; 吴春燕 1 ; 何启伟 3 ; 霍雨猛 3 ;

作者机构： 1.吉林农业大学园艺学院

2.南京农业大学园艺学院

3.山东省农业科学院蔬菜研究所

关键词： 薹菜;CYP79B5;基因克隆;原核表达

期刊名称： 南京农业大学学报

ISSN： 1000-2030

年卷期： 2010 年 33 卷 03 期

页码： 35-40

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以薹菜品种京研薹菜叶片cDNA为模板,采用RT-PCR技术,获得了编码薹菜CYP79B5基因全序列1 847 bp,包含有1 620 bp的开放阅读框,编码540个氨基酸。以薹菜基因组DNA为模板,获得了2 112 bp的目的片段。经比对发现其氨基酸序列与油菜、白芥、拟南芥等CYP79B5编码的氨基酸序列具有较高同源性,与油菜同源性达100%。经过生物信息学分析,发现所推导的氨基酸序列具有明显的CYP蛋白信号域,且可以在SWISS-MODEL数据库中搜索到与之相近的三维结构。扩增CYP79B5完整的编码区序列,构建pET-24α(+)重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导融合蛋白高效表达,SDS-PAGE电泳检测发现在相对分子质量64 000处有一特异条带,与预期的目的产物蛋白带大小一致。

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