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肉用杂交犊牛小肠上皮细胞的分离培养和鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 刘倚帆 1 ; 谭秀文 2 ; 游伟 2 ; 张相伦 2 ; 姜富贵 2 ; 宋恩亮 2 ; 万发春 2 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所

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关键词： 犊牛;小肠上皮细胞;联合消化法;细胞鉴定;核型分析

期刊名称： 动物营养学报

ISSN： 1006-267X

年卷期： 2019 年 005 期

页码： 2278-2286

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本试验旨在建立肉用杂交犊牛小肠上皮细胞分离培养和鉴定的方法,为研究犊牛小肠上皮细胞营养吸收、免疫调控及肠道屏障功能提供原代细胞培养模型.选用新生未吮乳的肉用杂交犊牛的空肠组织,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法对小肠上皮细胞进行分离,应用相差消化法和相差贴壁法对犊牛小肠上皮细胞进行纯化.通过细胞形态学观察、生长曲线、免疫荧光及染色体核型分析等方法来鉴定细胞.结果表明:1)应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法得到的犊牛小肠上皮细胞生长状况良好,经纯化后得到90%以上纯度的犊牛小肠上皮细胞,并稳定传代至10代以上; 2)犊牛小肠上皮细胞的生长曲线为"S"形,符合细胞增殖规律; 3)免疫荧光鉴定犊牛小肠上皮细胞特异性表达角蛋白13和绒毛蛋白; 4)透射电镜观察发现犊牛小肠上皮细胞边缘有微绒毛结构,细胞与细胞之间的紧密连接结构清晰可见; 5)染色体核型分析显示细胞内含有60条染色体,形态正常,呈二倍体核型.综上所述,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化及相差贴壁纯化成功得到犊牛小肠上皮细胞,为研究犊牛小肠上皮细胞营养物质吸收、免疫调控和肠道屏障功能提供了细胞素材.

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