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人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 张晓玮 1 ; 彭振英 1 ; 陈高 1 ; 郑玲 1 ; 于金慧 2 ; 毕玉平 1 ; 边斐 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院生物技术研究中心

2.山东省农作物种质资源中心

关键词： 胰岛素原;密码子优化;大肠杆菌表达

期刊名称： 山东大学学报(理学版)

ISSN： 1671-9352

年卷期： 2015 年 50 卷 11 期

页码： 8-15+22

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将人胰岛素原基因序列(human proinsulin,PI)经密码子优化后与Trx A蛋白融合表达,构建原核表达载体Trx A-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、Trans B(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白Trx A-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。Trx A-PI用肠激酶酶切后,利用His Trap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。

  • 相关文献

[1]ThIPK2基因植物表达载体的构建. 张淑娟,宋国琦,高洁,王姣,李玉莲,黄承彦,樊庆琦,隋新霞,楚秀生,李根英. 2013

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