文献类型： 中文期刊
作者： 陈立伟 1 ; 宗晓娟 2 ; 王文文 1 ; 王甲威 2 ; 魏海蓉 2 ; 徐丽 2 ; 严雪瑞 1 ; 刘庆忠 2 ;
作者机构： 1.沈阳农业大学植物保护学院
2.山东省果树研究所
关键词： 樱桃病毒A;外壳蛋白;基因克隆;原核表达
期刊名称： 中国农学通报
ISSN： 1000-6850
年卷期： 2012 年 28 卷 13 期
页码： 195-199
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为制备樱桃病毒A(Cherry virusA,CVA)抗血清,克隆CVA外壳蛋白基因(CP),构建原核表达载体,优化蛋白表达条件。根据CVA全基因组序列(NC_003689.1)设计特异引物,RT-PCR方法扩增CVA外壳蛋白基因,克隆、测序,构建原核表达载体pET30a-CVACP,转化大肠杆菌BL21(DE3)株系,采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。序列分析显示,该区段长为603bp,编码201个氨基酸,与法国分离物PF(HQ267856.1)的同源性为96.8%,与印度分离物JKSPMi-5(FN669548.1)同源性为86.3%。成功构建了原核表达载体pET30a-CVACP,SDS-PAGE电泳分析显示,转pET30a-CVACP载体的BL21(DE3)菌株表达分子量约24kDa的重组蛋白,该重组蛋白在37℃、1.5mmol/L IPTG、诱导4h条件下表达量最大。
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