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胚柄特异性表达顺式元件结合蛋白酵母单杂交文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 宋国琦 1 ; 王兴军 1 ; 赵传志 1 ; 夏晗 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院高新技术研究中心

关键词： 胚柄特异基因;顺式元件;酵母单杂交

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2011 年 19 卷 05 期

页码： 175-181

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与胚柄特异基因G564启动子顺式元件结合的转录因子。本研究根据植物胚柄特异表达基因G564启动子关键序列(GAAAAGCGAA)合成了5次串联重复序列,并与报告质粒pHIS2.1连接构建诱饵载体pHIS2.1-G564-5A;以纯化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼嫩种子mRNA为模板,合成SMARTTMⅢ和CDSⅢ锚定末端dscDNA;并将dscDNA与线性化融合表达载体pGADT7-Rec2以及诱饵载体pHIS2.1-G564-5A共转化到酵母Y187,构建酵母单杂交文库。文库的共转化效率为5.53×105cfu/μg。对文库中的阳性克隆进行测序,获得117条可读序列。对其进行基因功能注释并进一步分析基因的功能发现,具有DNA结合功能的蛋白14个,具有蛋白质结合功能的蛋白8个。上述22个蛋白包括TATA结合蛋白1(TBP1),支架结构相关区(SAR)DNA-结合蛋白,胚珠发育蛋白,G-box结合因子1(GBF1),组蛋白H3等。本研究为分离和克隆胚柄中特异表达的转录因子提供了候选基因。

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