文献类型： 中文期刊
作者： 隋炯明 1 ; 何心凤 1 ; 郭真 1 ; 李广存 2 ; 王晶珊 1 ; 郭宝太 1 ;
作者机构： 1.青岛农业大学生命科学学院
2.山东省农业科学院蔬菜研究所
关键词： 马铃薯卷叶病毒;CP基因;缺失突变;原核表达;抗血清
期刊名称： 园艺学报
ISSN： 0513-353X
年卷期： 2012 年 39 卷 10 期
页码： 1949-1957
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 利用RT-PCR扩增马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白(CP)基因(PLRV-CP),回收大小约630bp的特异性扩增片段并进行T-A克隆,测序表明该基因长度为627bp,与已报道的36个PLRV-CP基因的核苷酸序列的同源性大于96%。以pBAD/Thio-TOPO为起始载体,构建了PLRV-CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP。以pBAD-LRCP为模板,用PCR法删除了该基因富含精氨酸稀有密码子的第52～177核苷酸,获得了PLRV缺失突变CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP-126。用阿拉伯糖诱导工程菌TOP10(pBAD-LRCP-126),获得了34kD的诱导表达的融合蛋白(重组CP)。用镍离子亲和层析法从包涵体中纯化出了高纯度的重组CP,用纯化的重组CP作抗原免疫家兔获得了PLRV特异性的抗血清,间接ELISA检测显示效价为1︰12800。本研究结果为利用重组CP作抗原大量制备PLRV抗血清奠定了基础。
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