文献类型： 中文期刊

作者： 韩宏宇 ¹ ; 马秀丽 ² ; 黄兵 ² ; 李建亮 ¹ ; 张玉瑶 ¹ ; 于可响 ² ; 崔言顺 ¹ ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院

2.山东省农业科学院家禽研究所禽病研究中心

关键词： 新型鸭呼肠孤病毒;SYBR GreenⅠ;实时荧光定量RT-PCR

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2015 年 27 卷 08 期

页码： 1331-1336

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低可检出15个拷贝的病毒c DNA,其病毒最低检出量为0.5TCID50。该方法具有良好的特异性,对鸭坦布苏病毒(DTMUV)、A型鸭甲肝病毒(DHV-1)、C型鸭甲肝病毒(DHV-3)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)、鸭疫里默氏杆菌(RA)的检测结果均为阴性。该方法重复性好,组内变异系数为0.32%~0.91%,组间变异系数为1.03%~1.51%。利用该方法对人工感染雏鸭的粪便排毒情况进行检测,结果发现,攻毒后2~12 d是粪便排毒期,其中3~6 d是排毒高峰期。临床样品检测结果表明,该方法比常规RT-PCR具有更高的敏感性,而且从收到样品到得出检测结果只需4 h。