科研产出
多重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌方法的建立与应用
《畜牧兽医学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：参照GenBank发表的序列,在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16S rRNA与23S rRNA之间的区域设计了3对引物,参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA的序列设计1对引物,建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法。参照Skladny的方法制备模拟了细菌感染临床标本。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性,多重PCR方法检测乳样中的金黄色葡萄球菌的细菌最小浓度为104CFU/mL,检测无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌的细菌最小浓度分别为102CFU/mL、103CFU/mL和103CFU/mL。通过对采自临床型乳腺炎(46个)和隐性乳腺炎(167个)动物共计213个乳样分别用传统细菌学培养法和多重PCR方法进行检测,多重PCR对金黄色葡萄球菌和酵母真菌的检测具有更高的检出率(P<0.01),但该方法对无乳链球菌和停乳链球菌的检出率与培养法差异不显著(P>0.05)。
关键词： 多重PCR 乳腺炎 金黄色葡萄球菌 无乳链球菌 停乳链球菌 酵母真菌
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肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌PCR诊断方法的建立
《家畜生态学报 》 2006
摘要：本研究建立了一种同时检测大肠杆菌和魏氏梭菌的二重PCR方法,根据兔肠致病性大肠杆菌(REPEC)的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因的基因文库,设计了两对分别与eae基因和α-toxin基因互补的引物,用这两对引物对同一样品中的REPEC和魏氏梭菌模板进行二重PCR扩增。结果均得到了两条特异性大小与试验设计相符的833bp(REPEC)和324bp(魏氏梭菌)的扩增条带,而对其它3种病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,该二重PCR技术能检出10cfu的REPEC,10cfu的魏氏梭菌。
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利用多重PCR检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌的毒力基因
《中国预防兽医学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：我们建立了一种同时检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌毒力基因的二重PCR方法,在一次PCR反应中同时扩增兔肠致病性大肠杆菌(REPEC)的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因,扩增产物经电泳,出现与阳性对照细菌条带大小一致的条带即判断为该标本阳性,本试验还对79份腹泻兔粪便或肠内容物样品进行了检测,结果35.4%(28/79)检出eae+的REPEC,而魏氏梭菌的检出率为6.3%。敏感性试验结果表明,该二重PCR能检出10CFU的REPEC,10CFU的魏氏梭菌,具有简便、快速、特异、经济等特点,宜于临床应用。
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