科研产出
基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒(IBV)环介导等温扩增(LAMP)检测体系,为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据NCBI中收录的IBV 5a+5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物,通过对反应体系各组分和条件的优化,建立IBV LAMP检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂,对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测,比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了IBV LAMP检测方法,该方法能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒,比普通PCR方法敏感100倍,而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时,阴阳性样品均有强烈的颜色对比,其中0.05mmol/L钙黄绿素与0.6mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断,其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中,LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的IBVLAMP检测方法,该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。
关键词： 传染性支气管炎病毒 环介导等温扩增 荧光显色 钙黄绿素
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鸡传染性支气管炎病毒山东株的遗传变异分析
《山地农业生物学报 》 2009
摘要：采用RT-PCR方法对1株传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)Chicken-SD-E-04的S1和N基因进行扩增、克隆测序。通过序列分析发现:该分离株的N基因相对较为保守,与参考毒株的氨基酸同源性在87.1%~91.2%;从N基因的遗传关系树上分析显示Chicken-SD-E-04与其他多数分离株间及疫苗株的遗传距离较远。而就S1基因而言,分离株与参考毒株的氨基酸同源性在73.2%~80.1%;从S1基因的遗传关系树上分析发现Chicken-SD-E-04与疫苗株的遗传距离较远,且处于不同的分支上。其结果说明这株山东分离株具有明显的地域性;而且也从分子水平上证实了目前山东流行毒株与传统疫苗株的遗传距离较远。
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2006-2008年山东鸡传染性支气管炎病毒分离株S1与N基因的分子特征
《畜牧兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了调查2006-2008年山东省鸡传染性支气管炎的分子流行病学特征,应用RT-PCR方法分别扩增了14株传染性支气管炎病毒地方毒株S1基因和N基因,并进行了基因克隆与测序工作。对此14株病毒的S1基因序列利用限制性内切酶HaeⅢ进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析,结果显示可以将IBV毒株分为3种不同的基因型。其中11个毒株与LX4毒株有相同的RFLP分型,2株病毒属于Mass基因型,1个毒株有特异的RFLP分型。并将这些分离毒株与11个参考毒株分别进行了基因与氨基酸系统进化树关系分析。S1基因分析结果显示将这些毒株分成3个基因型,与RFLP分析的分型结果一致。11株病毒同属于LX4类型的毒株,分离毒株核苷酸序列相互之间有95.4%~99.7%的同源性。基因Ⅱ型与疫苗株H120和M41的同源性很高。属于基因Ⅲ型的1个毒株形成了独特的基因型。N基因分析结果表明:12株病毒与LX4属于同一基因型,有着较高的同源性。另2株病毒与疫苗株H120同源性很高。以上分析结果表明:山东省IBV分离株存在较为广泛的基因突变、插入和缺失,同时,IBV毒株间的基因重组也可能是山东省IBV变异株产生的另一主要原因。
关键词： 传染性支气管炎病毒 S1基因 N基因 RFLP分析 基因型
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我国部分地区1996～2008年传染性支气管炎病毒分离株膜蛋白基因的遗传变异与系统进化分析
《中国动物传染病学报 》 2009
摘要：1996~2008年从我国不同地区分离30株传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Viruses,IBV)野毒株的M基因,采用RT-PCR方法克隆测定所分离的野毒株和澳大利亚T株的M基因序列,利用生物信息学软件与GenBank中公布的部分国内外IBV毒株的M基因序列进行比较分析,研究我国IBV的分子流行学特点和分子遗传变异规律。结果发现所测毒株M基因具有4种不同长度的开放阅读框:669bp、672bp、678bp和681bp,分别编码222、223、225和226个氨基酸的多肽,这些长度的差异是由5′端的核苷酸插入或缺失造成的。30个IBV分离株间的同源性在89.5%~100%之间。以疫苗株H120氨基酸位置为参照,在被比较的73株IBV M蛋白中发现62个位点存在变异,其中以2~5、10~16、44~46、217~222等4个区域氨基酸取代率较高。系统进化分析显示,被比较的73个IBV毒株分为5个进化群,我国的IBV分属于其中的4个群,其中第一群和第四群与我国所使用的疫苗病毒株相距较远。同时发现部分近年的分离株与10多年前分离株具有很近遗传进化关系。从M基因看,在我国出现了多种基因型IBV共存的现象,分离株与疫苗株的遗传差异提示我们需要对疫苗的选用做出重新评估。
关键词： 传染性支气管炎病毒 膜蛋白基因 分子流行病学 遗传变异
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传染性支气管炎病毒山东及北京分离株血清型及RFLP基因分型的比较研究
《中国兽医杂志 》 2002 北大核心
摘要：分离并鉴定出山东省不同地区的 IBV分离株 A、B、C、D和北京分离株 F,利用中和试验分别对各分离株及标准株M4 1 、T等进行血清分型。设计一对引物 ,分别对各毒株的 S1 基因进行 RT- PCR扩增 ,扩增片段长约 170 0 bp,利用其 PCR产物进行 Hae 酶切 ,根据酶切图谱 ,进行基因分型。结果表明 :A、C、D和 M4 1 酶切图谱相同 ,属 Mass基因型 ,分别为 90 0、4 0 0和30 0 bp左右的片段 ;北京 F株有 4条酶切条带 ,与 4 /91基因型不同 ,分别为 10 0 0、30 0、2 0 0和小于 10 0 bp左右的片段 ;B株有4条酶切条带 ,理论推断与 T株相似 ,分别为 70 0、5 0 0、30 0和 180 bp左右的片段 ,可能为同一基因型。血清学分型结果与基因分型结果不符。
关键词： 传染性支气管炎病毒 血清型 RT-PCR RFLP 基因型
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鸡4种病毒抗原液的浓缩及其四联油佐剂灭活苗的研制
《中国兽医杂志 》 2001 北大核心
摘要：本研究通过超滤浓缩技术对鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒和传染性法氏囊病病毒的尿囊液进行了 10倍或 10倍以上的浓缩处理 ,并按一定的比例配比研制成四联油乳剂灭活疫苗 ,对鸡的最小免疫剂量是 0 .2 5ml,免疫接种二周后 ,鸡新城疫和产蛋下降综合征病毒的 HI抗体效价分别达到 8log2 和 7log2 以上 ,传染性支气管炎和传染性法氏囊病病毒抗体 S/ P值均在 0 .2以上 ,抗体效价呈现明显的递增 ,抗体水平至少可维持 4个月以上。这一结果证明该试验采用的禽类病毒性抗原的浓缩方法 ,适合鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒和传染性法氏囊病病毒等不同抗原液的浓缩 ,同时为其它病毒尿囊液或细胞培养液的浓缩以及不同种类多联疫苗的研制奠定了基础
关键词： 鸡新城疫病毒 传染性支气管炎病毒 产蛋下降综合征病毒 传染性法氏囊炎病毒 抗原浓缩 四联疫苗
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用气管环交叉中和试验鉴定IBV山东分离株的血清型
《畜牧与兽医 》 2000 北大核心
摘要：利用气管环组织培养 ,通过交叉中和试验 ,以IBVM41 及T株作为对照 ,对从山东省分离的 4株传染性支气管炎病毒进行了血清型的初步分型。结果表明 ,4株中有 1株与T株为同一血清型 ,其余 3株既不属于M41 株 ,也不属于T株
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关于鸡传染性支气管炎病毒肾型变异株的研究
《山东畜牧兽医 》 2000
摘要：从病鸡肾脏分离到一株病毒 ,电镜观察病毒粒子呈圆形 ,直径 1 0 0 nm左右 ,有典型的冠状纤突。SPF鸡胚传代 ,鸡胚发育迟缓。气管环组织培养法测定 TCID50 为 1 0 6.4 /ml。分离毒对乙醚敏感 ,不耐热 ,56℃水浴 1 5min失活。病毒无血凝特性 ,但经兔 A型魏氏梭菌培养液处理后出现血凝性 ,HA效价为 3Log2。血清交叉中和试验结果表明 ,分离毒的血清型不同于已有的 Massachusetts、Connecticut、T、Delaware、Gray型 ,为一肾变异株。5代分离毒回归 2 5日龄雏鸡死亡率为 83%,病死鸡主要病变为花斑肾。对鸡免疫后第 7天抗体水平开始上升 ,第 30天抗体水平到达峰值 ( 1 2 Log2 ) ,能有效抵御强毒攻击
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