非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

矫健; 李建达; 韩先杰; 张琳; 张玉玉; 任素芳; 刘飞; 陈智; Nataliia Hrabchenko; 张文娟; 于江; 吴家强; 《山东农业科学 》 2023

摘要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种高度传染性病毒性疾病,发病率和死亡率高达 100%,对我国的生猪养殖业造成了毁灭性打击.p22 蛋白为ASFV的结构蛋白,本研究构建了重组原核表达质粒pET-32a-p22,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组p22 蛋白并纯化,经Western blot鉴定证实重组p22 蛋白与ASFV阳性血清有良好的免疫反应性.利用重组p22 蛋白免疫Balb/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到 2 株能够稳定分泌p22 蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株 2D6 和 5E7.经抗体亚型鉴定两株抗体均为IgG1 型;经Western blot鉴定,两株抗体能够特异性识别过表达的p22 蛋白.综上,本研究成功表达并纯化了p22 重组蛋白,制备了p22 单克隆抗体,为进一步探讨p22 蛋白的结构功能及其在ASFV中的感染致病机制提供了基础条件.

关键词： 非洲猪瘟病毒 p22蛋白 单克隆抗体 原核表达