科研产出
猪伪狂犬病病毒山东分离株gE和gD基因的克隆及序列分析
《中国兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：近年来,我国猪场内很多规模化猪场的伪狂犬病病毒野毒呈阳性,大部分中小规模猪场和小养殖场感染情况更为糟糕,使得伪狂犬病病毒的变异率增加,给该病的防控带来了更大的压力。为了深入了解本病的流行情况及研制新型疫苗用于该病的防治,本研究在流行病学调查的基础上从发生疑似伪狂犬病的2个猪场仔猪组织内各分离到1株PRV野毒株,分别命名为LY株和YSH株。参照已发表的PRV gE和gD基因序列,设计合成2对分别扩其全长的引物,使用高保真酶进行PCR扩增,将扩增得到的全长序列克隆到pEASY-Blunt载体中,并转化Trans1-T1感受态细胞,挑取阳性菌落的质粒进行酶切、测序鉴定,并与国内外其他毒株进行比较分析,构建遗传进化关系图。结果表明,2毒株与国内外其他毒株比较,gE、gD基因核苷酸序列的同源性分别为97.7%~100.0%和99.0%~100.0%;氨基酸序列的同源性分别为95.5%~100.0%和98.9%~100.0%,以gE、gD基因氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3~5年分离的PRVs形成一个相对独立的新分支。经过同源性及进化分析,可知新分离的2株伪狂犬病病毒株与欧美株的亲缘关系远,与亚洲株内中国株的亲缘关系近,初步判定属于国内流行株,并可能存在一定的抗原变异,这为进一步研究山东省猪群伪狂犬病病毒分子流行病学奠定了基础。
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伪狂犬病病毒LAMP检测方法的建立与应用
《中国兽医科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了能快速、高效地检测猪感染伪狂犬病病毒(PRV)的情况,本研究采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立了一种检测伪狂犬病病毒的可视、灵敏、快速、特异、经济的方法。结果表明,通过LAMP检测,在65℃条件下反应60 min就能得到检测结果,检测的灵敏度达到1×100copy,比常规PCR敏感100 000倍,并可经SYBR GreenⅠ染色后通过眼观就可判定结果。本试验对8个临床样本进行了检测,结果显示,LAMP检测方法比传统PCR更具有实用性,适合基层养殖场使用。相对传统RT-PCR和荧光RT-PCR而言,LAMP检测只需要45~60 min,本研究能在更短的时间确定检测猪感染伪狂犬病病毒的情况,并具有高灵敏度。
关键词： 伪狂犬病病毒 环介导等温扩增技术(LAMP) gE基因
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传染性喉气管炎病毒烟台株gE基因的克隆与序列分析
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)gE基因序列设计并合成1对引物,以烟台株为模板,用PCR法扩增出1条1.5kb的基因片段,并将其克隆至pMD18-T载体中。经电泳分析、酶切鉴定,将得到的重组质粒命名为pMD-gE并进行序列测定。将测序结果与ILTV美国标准攻毒毒株和中国王岗株,BHV-1,EHV-1,FHV-1,HHV-2,HHV-3,HVT,MDV-1,MDV-2,PRV的gE基因比较,发现核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%~11.9%和99.4%~15%。结果表明,不同ILTV毒株之间gE基因还是比较保守的,但不同疱疹病毒之间,gE基因的同源性较低。
关键词： 传染性喉气管炎病毒 烟台株 gE基因 克隆 序列分析
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