科研产出
核桃JrSnRK1α1.1调控种子油脂合成与积累
《生物技术通报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为探讨核桃SnRK1蛋白激酶对种子油脂合成与积累的调控机理，本研究以‘香玲’核桃种仁cDNA为模板，克隆分离得到SnRK1蛋白激酶α亚基的一个编码基因JrSnRK1α1.1，其CDS序列全长为1 539 bp，编码512个氨基酸。构建植物超表达重组载体PBI121-JrSnRK1α1.1，转化并获得了超表达核桃JrSnRK1α1.1基因的拟南芥株系J-1、J-2和J-3。与野生型拟南芥相比，转基因植株表型无明显差异。采用数码显微镜对转基因拟南芥株系种子进行观察，结果显示，相对于野生型，转基因拟南芥株系的种子瘪小、表皮皱缩；株系J-1、J-2和J-3瘪小种子占比分别为43.69%、60.80%和45.87%，显著高于野生型WT（8.43%）；种子的千粒重比野生型降低了27.95%-29.32%，差异显著；种子平均粒长和粒宽也显著变小；因此JrSnRK1α1.1可能参与了种子的发育进程。进一步对种子的粗脂肪含量进行测定，结果表明，与野生型相比，转基因拟南芥株系J-1、J-2和J-3的种子粗脂肪含量显著下降，分别比野生型下降9.66%、23.86%和17.61%。荧光双分子试验结果表明，核桃JrSnRK1α1.1与油脂合成关键转录因子JrWRI1互作。综上所述，超表达核桃JrSnRK1α1.1对拟南芥植株生长发育影响不明显，显著影响了拟南芥种子的发育，负调控种子油脂的合成与积累过程。
关键词： 核桃 JrSnRK1α1.1 转基因 种子 油脂 表型 千粒重
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洋葱orf393基因线粒体定位表达载体构建及功能初探
《分子植物育种 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：通过转基因拟南芥表型分析对洋葱线粒体差异表达基因orf393的功能进行了初步研究.通过In-Fusion Cloning的方法,将基因orf393与编码线粒体定位的靶向肽序列Rf1b5'融合,构建了orf393基因的线粒体定位表达载体pROK2-Rf1b5'-orf393,通过花序浸染法成功转化至野生型拟南芥,获得了雄性育性降低的拟南芥转基因植株,转基因植株的雄蕊花丝变短,柱头表面光滑几乎没有花粉附着,花药颜色暗淡无法正常开裂,种荚短小皱缩、结实率低.亚历山大染色实验结果显示,转基因植株的花药中花粉量少,仅含有极少量的活性花粉.初步证明线粒体基因orf393与细胞质雄性不育有一定关系,为明确orf393参与洋葱细胞质雄性不育的分子机制提供了参考.
关键词： 洋葱(Allium cepa L.) orf393 细胞质雄性不育 遗传转化
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玉米ZmGS5基因的克隆及其对转基因拟南芥种子发育的影响
《浙江农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：植物种子发育与产量密切相关,研究发现玉米ZmGS5基因与其籽粒发育呈显著性正相关。本研究利用同源克隆技术克隆玉米ZmGS5基因,该基因编码区全长1 491 bp,编码含496个氨基酸的丝氨酸羧肽酶。通过构建ZmGS5过表达载体,采用花序浸染法遗传转化拟南芥,观察转基因拟南芥植株表型及种子变化,初步解析ZmGS5在调控种子发育过程中的功能。结果表明,转基因拟南芥植株莲座叶直径增加,叶片增大,生物量、每株角果数和种子千粒重及种子大小均显著增加。该研究结果初步揭示了玉米ZmGS5基因在调控作物生长发育和产量中发挥重要作用。
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超长链多不饱和脂肪酸在棉花中的异源合成
《作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：从球等鞭金藻、眼虫、高山被孢霉和拟南芥中分别克隆到Δ9链延长酶、Δ8去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ15去饱和酶基因,利用我们的多基因聚合方法,将这4个基因聚合到植物表达载体pCambia2300上,其中每个基因都含有独立的CaMV35S启动子和Tnos终止子。利用农杆菌介导法将该表达载体转入棉花,通过卡纳霉素和PCR筛选获得转基因阳性植株,提取转基因阳性植株叶片总脂肪酸,用气相色谱分析法检测到花生四烯酸(AA,20:4Δ5,8,11,14)和二十碳五烯酸(EPA,20:5Δ5,8,11,14,17)含量分别达1.0%和5.0%。表明通过基因代谢工程在棉花中异源合成EPA是可行的,为进一步在棉籽中生产VLCPUFAs奠定了基础。
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玉米丛生芽体系的建立及抗除草剂转基因植株再生
《中国科学(C辑:生命科学) 》 2001 北大核心 CSCD
摘要：以玉米优良自交系为材料, 利用芽尖分生组织诱导胚状体和丛生芽, 建立起一种快速有效且取材不受季节限制的玉米丛生芽诱导体系. 以丛生芽组织块为受体, 用基因枪将从拟南芥(Arabidopsis thaliana)突变体中克隆的抗除草剂基因als (acetolac- tate synthase)导入玉米细胞, 经除草剂chlorsulfuron筛选得到抗性组织块并再生植株. PCR检测和Southern杂交表明, 部分再生植株转入了als基因. 除草剂喷施试验表明, 转基因植株及其子一代具有良好的抗除草剂特性. 建立了一种新的受基因型限制小的玉米离体培养及转基因受体系统, 能快速有效地获得大批转基因植株.
关键词： 玉米 丛生芽 转基因 als chlorsulfuron
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玉米愈伤组织的遗传转化及抗除草剂植株再生
《科学通报 》 2000 北大核心 CSCD
摘要：以玉米胚性愈伤组织为受体, 采用基因枪轰击法将来自拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)的突变抗除草剂基因als导入玉米愈伤组织细胞；转化后的细胞经除草剂chlorsulfuron筛选, 产生了抗性愈伤组织并再生植株. 经PCR检测和Southern印迹法鉴定, 部分再生植株转入了als基因. 喷施除草剂试验表明, 转基因植株具有良好的抗除草剂特性. 研究的目的是获得抗除草剂chlorsulfuron的转基因玉米, 并使这种高效除草剂能在小麦-玉米轮作区广泛使用. 另外, 通过喷施除草剂chlorsulfuron, 可以淘汰制种亲本中的杂株, 从而提高F1代种子的纯度.
关键词： 玉米 遗传转化 als chlorsulfuron
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