人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化

张晓玮; 彭振英; 陈高; 郑玲; 于金慧; 毕玉平; 边斐; 《山东大学学报(理学版) 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：将人胰岛素原基因序列(human proinsulin,PI)经密码子优化后与Trx A蛋白融合表达,构建原核表达载体Trx A-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、Trans B(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白Trx A-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。Trx A-PI用肠激酶酶切后,利用His Trap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。

关键词： 胰岛素原 密码子优化 大肠杆菌表达