科研产出
高度特异性小麦ATG8抗体的研制及其在细胞自噬检测中的应用
《作物学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：细胞自噬是一种进化上高度保守的溶酶体/液泡降解途径,对机体适应各种生物或非生物胁迫,以及维持自身正常生长发育具有重要的意义。自噬相关蛋白8 （autophagy-related protein 8, ATG8）是检测自噬的金标准。目前由于缺乏特异性好的小麦ATG8抗体,导致小麦细胞自噬研究进展缓慢。本研究通过人工合成小麦ATG8蛋白序列上的一段18个氨基酸的多肽作为抗原去免疫兔子,成功获得了高度特异性的小麦ATG8多克隆抗体。该抗体不仅能够识别小麦根、叶及种子中的ATG8蛋白条带,而且可以在根、叶中检测到细胞自噬结构,并首次在小麦籽粒中实现了细胞自噬结构的检测。本研究研制的小麦ATG8抗体,除了能够检测到小麦中常见的ATG8a-h等8种典型类型外,还能检测到一种非典型的新的ATG8蛋白,为深入开展植物细胞自噬调控机制研究以及优异新基因挖掘提供了最佳方法学基础。
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细胞自噬参与脱落酸介导的小麦耐盐作用
《农业生物技术学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：细胞自噬是植物受到环境胁迫时产生的一种自我防御机制.已有证据表明,细胞自噬参与小麦(Triticum aestivum)的耐盐过程,但其在耐盐中的作用及调控机理尚不清楚.本研究以耐盐小麦'德抗961'和不耐盐小麦'兰考323'为材料,通过溶酶体荧光探针和Western blot等方法进行细胞自噬水平的检测,发现盐胁迫促进两个品种小麦发生细胞自噬,但'德抗961'的细胞自噬水平明显高于'兰考323';阻断细胞自噬后,小麦幼苗的生长受到显著抑制.另外,'德抗961'中脱落酸(abscisic acid,ABA)信号途径的关键基因PYL1(pyrabactin 1)、PYL2、PYL3和SNRK2(sucrose non-fermenting related protein kinase 2)的表达量明显高于'兰考323';施加外源性ABA后,'德抗961'的细胞自噬水平明显高于'兰考323',推断ABA信号途径通过促进细胞自噬来提高小麦的耐盐性.本研究对于深入探讨小麦的耐盐机理、培育耐盐小麦新品种具有一定的理论和实践意义.
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血清浓度对心肌细胞自噬的影响
《滨州医学院学报 》 2015
摘要：目的观察不同血清浓度对心肌细胞自噬的影响。方法以大鼠胚胎心肌细胞系H9c2为标本,建立3个时间点6、12、24h,以及四个不同浓度0、2、5、10%来检测细胞的自噬程度。运用Western Blot检测心肌细胞LC3Ⅱ、P62的变化,吖啶橙染色检测酸性膜泡。结果培养6h之前,较高浓度10%血清自噬程度最低,6~12h随着血清浓度增高自噬被促进。24h后去血清组促进自噬,添加2,5,10%血清均能抑制自噬。结论在筛选促进自噬的因子时,应选择背景自噬较低的模型,作用效果在6h之内的因子首选10%血清培养的心肌细胞,作用效果在6~12h之间的选择无血清培养体系,作用效果在24h之后的可选择有血清培养体系。
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