FMDV3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用

苗勤; 吴香菊; 齐静; 丛晓燕; 李均同; 王林; 杜以军; 《山东农业科学 》 2024 北大核心

摘要：本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用.根据GenBank序列合成 3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41 构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15 细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测 3D蛋白在细胞内的表达及定位.通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50 等试验检测HEK-293T细胞中过表达 3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响.结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制.本研究为深入探究 3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础.

关键词： 口蹄疫病毒 3D蛋白 真核表达 Ⅰ型IFN信号通路